[發(fā)明專利]提升小鼠精子受精能力的HTF液滴及其制備、使用方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202110131104.6
• 申請日: 2021-01-30
• 公開（公告）號: CN112899220B
• 公開（公告）日: 2023-07-07
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 姚兵;趙山美子;靖俊;吳蓉花;曹思原;張光云
• 申請（專利權(quán)）人: 中國人民解放軍東部戰(zhàn)區(qū)總醫(yī)院
• 主分類號: C12N5/076
• 分類號: C12N5/076
• 代理公司: 南京北辰聯(lián)和知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 32350
• 代理人: 于忠洲

本發(fā)明公開了一種提升小鼠精子受精能力的HTF液滴及其制備、使用方法，其中制備方法步驟包括：于培養(yǎng)皿中制作200μL/滴的HTF液滴，并用組織石蠟油覆蓋HTF液滴，再放入培養(yǎng)箱中平衡；將小鼠SERPINA5人工合成蛋白粉末用無血清HTF配成小鼠SERPINA5人工合成蛋白濃儲(chǔ)，小鼠SERPINA5人工合成蛋白濃儲(chǔ)的濃度為240～260μg/mL；在HTF液滴中添加小鼠SERPINA5人工合成蛋白濃儲(chǔ)，使小鼠SERPINA5人工合成蛋白在HTF液滴中的濃度為1～2μg/mL。該提升小鼠精子受精能力的HTF液滴及其制備、使用方法能夠有效提升小鼠精子體外受精的能力，為在ART的精子體外獲能過程中優(yōu)化精子質(zhì)量提供了參考方法。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及精子體外獲能領(lǐng)域，尤其是一種提升小鼠精子受精能力的HTF液滴及其制備、使用方法。

背景技術(shù)

夫妻之間在無任何避孕措施下進(jìn)行正常性行為達(dá)一年以上卻未能懷孕者稱為不孕不育，其中由女方因素導(dǎo)致的稱不孕癥，由男方因素所導(dǎo)致的稱不育癥。目前我國不孕不育發(fā)病率達(dá)到15％，在發(fā)達(dá)國家，不孕不育的平均發(fā)病率則接近20％，且不孕不育夫妻的年齡已趨于年輕化。世界衛(wèi)生組織認(rèn)為，不孕不育將成為威脅人類健康的又一重大殺手，其為夫妻雙方帶來了很多心理與生理上的傷害，嚴(yán)重影響家庭的幸福指數(shù)。

輔助生殖技術(shù)(Assisted?Reproductive?Technology，ART)是現(xiàn)代醫(yī)學(xué)中治療不孕不育的重要手段。ART的應(yīng)用打破了人類歷史中只能自然繁衍的常規(guī)認(rèn)知，是生殖醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的一場技術(shù)革命。自第一例試管嬰兒誕生以來，ART不斷更新，對生命科學(xué)的發(fā)展有著劃時(shí)代的意義。近年來，由于男性精子質(zhì)量低而導(dǎo)致的不育明顯增多，使得ART需求量大幅增加。然而，目前ART整體成功率較低，仍需通過優(yōu)化其常規(guī)操作步驟從而提升其成功率。一次成功的體外受精離不開高質(zhì)量精子的獲得，優(yōu)化與卵子結(jié)合前的精子質(zhì)量是提升ART成功率的關(guān)鍵。在ART過程中，獲得男性不育患者精液后，首先需進(jìn)行精子優(yōu)選，隨后需對優(yōu)選后精子進(jìn)行體外獲能，只有成功獲能后的精子才能與卵子結(jié)合。因此，如何提升精子體外獲能效率成為提高ART過程中精子質(zhì)量的關(guān)鍵，亦是目前輔助生殖領(lǐng)域研究的熱點(diǎn)問題。

精子培養(yǎng)液組成成分直接或間接影響精子體外獲能的進(jìn)程，當(dāng)前，HTF是一種臨床上經(jīng)常使用的精子培養(yǎng)液。因此，通過向HTF中添加新的成分促進(jìn)精子體外獲能、改善精子質(zhì)量是目提升ART成功率的一條新思路。

SERPINA5(蛋白C抑制劑，PCI)是絲氨酸蛋白酶抑制蛋白家族成員之一，在雄性生殖道中高表達(dá)，雄性Serpina5缺陷型小鼠不育，這表明SERPINA5在精子形成和雄性生殖過程中起著重要作用。SERPINA5在精子各參數(shù)正常卻不育男性的精子中表達(dá)量升高，其位于射出精子或從附睪尾中取出精子的頂體頂部，與精子頂體酶前體結(jié)合，抑制其在頂體反應(yīng)前被釋放，避免其破壞精子結(jié)構(gòu)。

發(fā)明內(nèi)容

發(fā)明目的：提供一種提升小鼠精子受精能力的HTF液滴及其制備、使用方法，能夠有效提高了小鼠精子體外受精的能力。

技術(shù)方案：本發(fā)明所述的提升小鼠精子受精能力的HTF液滴，每1mL?HTF液滴中含有1～2μg小鼠SERPINA5人工合成蛋白。

作為HTF液滴的進(jìn)一步限定方案，每1mLHTF液滴中含有1μg小鼠SERPINA5人工合成蛋白。

本發(fā)明所述的提升小鼠精子受精能力的HTF液滴制備方法，包括如下步驟：

步驟1.1，于培養(yǎng)皿中制作200μL/滴的HTF液滴，并用組織石蠟油覆蓋HTF液滴，再放入培養(yǎng)箱中平衡；

步驟1.2，將小鼠SERPINA5人工合成蛋白粉末用無血清HTF配成小鼠SERPINA5人工合成蛋白濃儲(chǔ)，且小鼠SERPINA5人工合成蛋白濃儲(chǔ)的濃度為240～260μg/mL；