[發明專利]一種病毒中和抗體的檢測方法、系統及其應用

有效

• 申請號: 202110129825.3
• 申請日: 2021-01-29
• 公開（公告）號: CN112945919B
• 公開（公告）日: 2023-04-28
• 發明（設計）人: 姜晶
• 申請（專利權）人: 上海睿鈺生物科技有限公司
• 主分類號: G01N21/64
• 分類號: G01N21/64
• 代理公司: 北京品源專利代理有限公司 11332
• 代理人: 鞏克棟

本發明提供一種病毒中和抗體的檢測方法、系統及其應用。所述檢測方法包括獲取孔板中實驗組樣品的顯微圖像、分析所述實驗組樣品的顯微圖像以及基于所述實驗組樣品的圖像分析結果得到所述宿主細胞的感染程度和所述待測物的病毒中和能力的步驟。該檢測方法對孔板中的熒光標記樣本進行成像和分析，快速得出病毒中和抗體能力的實驗數據，避免了細胞裂解或胰酶消化等過程對細胞自然狀態的干擾，且該方法操作流程簡單，不需要特殊的材料或耗時的維護。

技術領域

本發明屬于生物醫藥技術領域，具體涉及藥物的開發和篩選，尤其涉及一種病毒中和抗體的檢測方法、系統及其應用。

背景技術

病毒中和抗體的功能研究主要涉及病毒中和能力和抗體結合能力的研究。抗體結合能力通常采用酶聯免疫法(Enzyme-Linked?ImmunoSorbent?Assay，ELISA)、生物膜干涉技術(Biolayer?Interferometry，BLI)和流式細胞熒光分選技術(Fluorescenceactivated?Cell?Sorting，FACS)等方法研究。抗體中和能力一般通過假病毒報告基因或病毒蝕斑減少中和實驗(PRNT)來評估。但以上幾種方法均存在各自的弊端與局限性，難以滿足快速高通量篩選的迫切要求。

其中，酶聯免疫法的核心就是讓抗體與酶復合物結合，然后通過顯色來進行檢測；該方法無法準確地評估抗體與天然構象抗原蛋白的結合，容易產生假陽性數據。生物膜干涉技術是基于干涉光譜圖的位移變化來檢測生物分子間的相互作用，此方法需要待檢測的蛋白必須有標簽才能以親和的方式固定在傳感器上。

FACS的工作原理是將待測細胞經特異性熒光染料染色后放入樣品管中，在氣體的壓力下進入充滿鞘液的流動室，在鞘液的約束下細胞排成單列由流動室的噴嘴噴出，形成細胞柱，后者與入射的激光束垂直相交，液柱中的細胞被激光激發產生熒光；該方法可以快速、客觀地檢測單個細胞的多項特征，但是，其所需的儀器相對昂貴，操作復雜，維護成本高，且需要專員管理。

蝕斑減少中和實驗是檢測血清中和抗體的一種敏感性較高的方法，實驗以使蝕斑數減少50％的血清稀釋度作為其中的效價。實驗使用定量的病毒與不同稀釋度的等量血清混合后趕作，接種預先準備好的單層細胞，再覆蓋上營養瓊脂置于37℃二氧化碳培養箱培養，數天后分別統計蝕斑數，計算該血清的蝕斑中和效價。其操作原理與傳統的血清中和實驗大致相同；該方法實驗周期長，非常依賴人工操作，自動化程度低。

因此，開發快速有效地檢測抗體結合和功能的方法，將有助于評估和篩選靶向病毒的抗體。

發明內容

鑒于現有技術中存在的問題，本發明的目的在于提供一種病毒中和抗體的檢測方法、系統及其應用。所述高通量測定病毒中和抗體試驗的方法檢測速度快，通量高，對于靶向病毒抗體的評估和篩選具有積極的影響。

為達此目的，本發明采用以下技術方案：

第一方面，本發明提供一種病毒中和抗體的檢測方法，具體包括如下步驟：

獲取孔板中實驗組樣品的顯微圖像，所述實驗組樣品為至少兩種濃度的待測物與病毒顆粒分別混合后，再與宿主細胞混合后得到的樣品，其中，所述病毒顆粒攜帶熒光標記A或者與攜帶熒光標記A的標記物結合，在明場和/或與所述熒光標記A匹配的熒光激發光激發下對所述實驗組樣品進行顯微成像，得到所述實驗組樣品的顯微圖像；

分析所述實驗組樣品的顯微圖像，得到所述實驗組樣品的圖像分析結果；

基于所述實驗組樣品的圖像分析結果得到所述宿主細胞的感染程度和所述待測物的病毒中和能力。