[發明專利]用于檢測小麥小穗數著生密度的KASP引物組及其應用

在審

• 申請號: 202110129159.3
• 申請日: 2021-01-29
• 公開（公告）號: CN112760402A
• 公開（公告）日: 2021-05-07
• 發明（設計）人: 胡文靜;高德榮;裔新;張勇;陸成彬;張春梅
• 申請（專利權）人: 江蘇里下河地區農業科學研究所
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12Q1/6858;C12N15/11
• 代理公司: 江蘇圣典律師事務所 32237
• 代理人: 楊文晰

1. 用于檢測用于檢測小麥小穗著生密度的KASP引物組，其特征在于，所述KASP引物組包括：核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示的引物1，核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示的引物2，核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示的引物3。

2.如權利要求1所述的KASP引物組在檢測小麥小穗著生密度中的應用。

3.如權利要求1所述KASP引物組所特異性擴增的分子標記，所述分子標記的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示。

4.如權利要求2所述的應用，其特征在于，所述應用是指，以所述KASP引物組為引物，待測小麥基因組DNA為模板進行PCR擴增，然后利用多功能酶標儀檢測PCR擴增產物并進行基因分型，若擴增結果顯示待測小麥基因分型與揚麥15相同，則該待測小麥含有等位基因T；反之，則待測小麥含有等位基因C；含有等位基因T的小麥小穗著生密度高于含有等位基因C的小麥。

5.如權利要求4所述的應用，其特征在于，所述PCR擴增是指：

PCR反應體系：濃度為30 ng/μL的待測小麥DNA模板2μL、引物工作液0.08 μL、KASPMaster Mix 2.5μL，以無菌超純水補充至5 μL；所述引物工作液包括：30μL濃度為100 μM的引物1 、12μL濃度為100 μM的引物2 、12μL濃度為100 μM的引物3，以無菌超純水補充至100μL；

PCR反應程序；第一步，95℃預變性15 min；第二步，95℃變性20 s、65–57℃ 60 s，每個循環下降1℃，共9個循環；第三步，95℃變性20 s、57℃復性1 min，32個循環。

6.一種用于檢測小穗著生密度的PCR檢測試劑盒，該PCR檢測試劑盒包括核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示的共用引物1，核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示的引物2，核苷酸序列如SEQID NO.3所示的引物3。

7.如權利要求6所述的PCR檢測試劑盒，其特征在于，所述PCR檢測試劑盒包括：濃度為30 ng/μL的待測小麥DNA模板2μL、引物工作液0.08 μL、KASP Master Mix 2.5μL、無菌超純水補充至5 μL；所述引物工作液包括：30μL濃度為100 μM的引物1、12μL濃度為100 μM的引物2 、12μL濃度為100 μM的引物3，以無菌超純水補充至100 μL。