[發明專利]一種柞樹皮多糖的制備及應用

有效

• 申請號: 202110122502.1
• 申請日: 2021-01-29
• 公開（公告）號: CN112724275B
• 公開（公告）日: 2022-07-26
• 發明（設計）人: 周鴻立;劉楊;趙淑慶
• 申請（專利權）人: 吉林化工學院
• 主分類號: C08B37/00
• 分類號: C08B37/00;A61P39/06;A61P35/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種柞樹皮多糖的制備方法，其特征在于所制備的QMBP-1，QMBP-2，QMBP-3和QMBP-4四個多糖的分子量分別為1960kDa、1036kDa、922kDa和919kDa；所述的多糖制備工藝如下步驟：

（1）干燥的樹皮粉末用60%的乙醇在90℃下回流4h，回流兩次，去除脂溶性成分；將干燥后的殘渣用沸水按1：20g/ml的比例提取2h；在兩次提取后，用旋轉蒸發器在55℃減壓下將上清液合并濃縮至1/4-1/5體積，然后加入一定量的95%乙醇沉淀，直到乙醇含量下降到80%，在4°C下沉淀12h；沉淀物在離心機上離心，然后冷凍干燥得到蒙古柞樹皮的粗多糖；粗多糖含量為37.32%±1.53%，粗多糖的蛋白質含量為6.14±1.07%；

（2）將500mg粗多糖溶于去離子水中，裝入預先處理好的2.6×30cm的棉狀DEAE柱；用0.6MNaCl溶液洗脫，流速1.0ml/min；將多糖洗脫液濃縮，用水透析，冷凍干燥得純化后柞樹皮多糖；提取得到純化后含量增加到68.42%±3.25，蛋白質下降為1.43±0.26%；

（3）將300mg純化后的多糖溶解在蒸餾水中，裝入到2.6×30cm的DEAE-52纖維素柱上，分別用200ml蒸餾水和0.1、0.2、0.3、0.4和0.5MNaCl溶液洗脫，流速為1.0ml/min，由于0.4M和0.5M分數太小，舍棄；收集的每種多糖的體積為5ml，用苯酚-硫酸法檢測，最終得到63mg的QMBP-1、8mg的QMBP-2、29mg的QMBP-3和42mg的QMBP-4四個組分的多糖，將多糖濃縮，用水透析、冷凍干燥；

（4）所制備四個組分的多糖的單糖組成的摩爾比分別為：QMBP-1的為D-甘露糖：核糖：鼠李糖：D-葡萄糖醛酸：D-半乳糖醛酸：D-葡萄糖：D-半乳糖：木糖＝1.62：0.24：0.68：0.32：1.00：4.97：4.88：35.92；QMBP-2的為D-甘露糖：鼠李糖：D-葡萄糖醛酸：D-半乳糖醛酸：D-葡萄糖：D-半乳糖：木糖＝0.62：0.45：0.21：1.00：0.50：1.42：3.31；QMBP-3的為D-甘露糖：鼠李糖：D-葡萄糖醛酸：D-半乳糖醛酸：D-葡萄糖：D-半乳糖：阿拉伯糖＝0.15：0.23：0.04：1.00：0.15：0.30：0.80；QMBP-4的為D-甘露糖：鼠李糖：D-葡萄糖醛酸：D-半乳糖醛酸：D-葡萄糖：D-半乳糖：阿拉伯糖＝0.85：0.69：0.07：1.00：0.38：0.79：1.45；

（5）所制備的柞樹皮粗多糖對DPPH自由基的清除率的IC₅₀為8.7±0.25μg/ml；總還原力的IC₅₀為0.09±0.36mg/ml；對ABTS自由基的清除率的IC₅₀為8.3±0.16μg/ml，說明其具有較好的抗氧化活性；

（6）所制備的四種柞樹皮多糖對A549細胞增殖活性實驗均具有一定的抗腫瘤活性，其中QMBP-1具有顯著的活性，最大抑制濃度為0.4mg/ml時，在48h內的最大抑制率為40%。

2.根據權利要求1所述的柞樹皮多糖的制備方法，其特征在于，由紫外-可見光譜及紅外光譜分析得到，四個組分的多糖含有-OH、-CH₂、COO-和糖醛酸；在QMBP-3和QMBP-4中另存在S=O、C-O-S、C-OH和C-O-C。