[發明專利]一種小葉楨楠的組織培養育苗方法

有效

• 申請號: 202110116374.X
• 申請日: 2021-01-28
• 公開（公告）號: CN112772416B
• 公開（公告）日: 2022-08-12
• 發明（設計）人: 何勇;徐曉明;李曉蘭
• 申請（專利權）人: 蘇州金鐵紅林業科技有限公司
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 成都科泰六核知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 51286
• 代理人: 楊正輝

1.一種小葉楨楠組織培養育苗方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)外植體的選擇和處理：選取無病蟲害野生植株的當年枝條上的幼嫩葉，消毒后切割成大小為0.5cm*0.5cm的方塊，選取葉片部位帶有葉緣、葉肉、葉脈或葉基部的方塊為作為培養的外植體；

(2)愈傷組織的培養：將步驟(1)的外植體接入愈傷組織誘導培養基中進行愈傷組織培養，得到愈傷組織；所述的誘導培養基為改良MS母液+0.5-1.5mg/L的BA+0.1-0.5mg/L的NAA+0.005-0.015μg/L的油菜素內酯；

(3)芽誘導培養：將步驟(2)培養得到的愈傷組織接入芽誘導培養基中進行芽誘導培養，得到組培芽；所述的芽誘導培養基為改良MS母液+1.5-2.5mg/L的BA+0.8-1.5mg/L的NAA+0.003-0.006μg/L異戊烯腺嘌呤+0.005-0.015μg/L的油菜素內酯；

(4)增殖培養：將步驟(3)的組培芽切割成芽叢或帶腋芽莖段接種到增殖培養基上進行增殖培養，得到芽苗；每瓶接種芽叢或莖段不少于5個，每個芽叢芽數不少3個，繼代培養代數控制在10代內，培養室的溫度控制在23℃±2℃，光照強度為1300～1500lx，光照時間為每天10～12h；所述的增殖培養基為改良MS母液+1.0-2.0mg/L的BA+1.0-1.8mg/L的NAA+0.01-0.015μg/L異戊烯腺嘌呤+0.01-0.025μg/L的油菜素內酯；

(5)生根培養：將步驟(4)的芽苗接入生根培養基中進行生根培養，得到組培苗；所述的生根培養基為改良MS母液+1.8-2.5mg/L的BA+1.5-2.5mg/L的NAA；

(6)移栽煉苗：將步驟(5)的組培苗除去培養基后移栽入基質中，進行煉苗，煉苗完成后得到小葉楨楠幼苗；

所述改良MS母液是指在MS培養基的基礎上更改了部分組分和配比的培養基；所述的更改包括：調整MS培養基中KNO₃的濃度為1500mg/L，調整NH₄NO₃的濃度為550mg/L，調整蔗糖的濃度為25g/L，調整瓊脂的濃度為7g/L，調整pH值為6.0；添加800mg/L的NaH₂PO₄和1.4mg/L的泛酸鈣。

2.根據權利要求1所述的育苗方法，其特征在于，步驟(1)中所述的消毒方法為將清潔后的幼嫩葉置于消毒劑中浸泡2～5min，再用0.1％的升汞溶液消毒1～3min后，用無菌水沖洗5～8次，并用無菌濾紙擦干其表面水分；所述的消毒劑為pH值5.0～6.5、有效氯素濃度10～30mg/L的消毒劑。

3.根據權利要求1所述的育苗方法，其特征在于，步驟(2)愈傷組織的培養條件為：在20～25℃條件下，暗培養3～7天后，再轉為光培養7-10d，所述光培養的光照強度1800～2400lx，光照時間11～12h/d。

4.根據權利要求1所述的育苗方法，其特征在于，步驟(3)芽誘導的培養條件為：光照條件下培養溫度為22-25℃，非光照條件下培養溫度為12-18℃，光照強度為1000-1400Lux，光照時間為8-10h/d。

5.根據權利要求1所述的育苗方法，其特征在于，步驟(5)生根培養的培養條件為：光照條件下培養溫度為25-28℃，非光照條件下培養溫度為18-23℃，光照強度為2200-3000Lux，光照時間為11-12h/d。