[發明專利]改良凝膠電泳檢測血清中低密度脂蛋白的方法

在審

• 申請號: 202110116086.4
• 申請日: 2021-01-28
• 公開（公告）號: CN112697565A
• 公開（公告）日: 2021-04-23
• 發明（設計）人: 吳瑤瑤;鄧結飛;唐紅艷;汪培
• 申請（專利權）人: 安徽佳創生物科技有限公司
• 主分類號: G01N1/31
• 分類號: G01N1/31;G01N27/447
• 代理公司: 合肥興東知識產權代理有限公司 34148
• 代理人: 王偉

1.改良凝膠電泳檢測血清中低密度脂蛋白的方法，其特征在于：包括如下步驟：

步驟1，樣品采集：采集空腹12h以上的靜脈血樣品，在3h內對血清進行分離，若不能及時測定，將血清樣本放置在-80℃保存；

步驟2，染色：取步驟1得到的血清，加入染液，混合均勻，在37℃水浴條件下孵育15-25min，之后進行離心，離心后取上清，得到染色后的血清；

步驟3，凝膠管制備：取玻璃管固定在支架上，在玻璃管內加入分離膠，分離膠的膠層高度為71-79mm，待凝膠表面聚合平整后，在玻璃管內加入濃縮膠，濃縮膠的膠層高度為6-14mm，待凝膠表面聚合平整后，使用白熾燈光照30mim進行光聚合，得到凝膠管；

步驟4，電泳：將步驟3制備得到的凝膠管垂直放入圓盤電泳槽，分別在正負極電泳槽內注入電泳緩沖液，將步驟2制備的染色后的血清緩慢加入凝膠管內，覆蓋在分離膠的表面，接通穩壓電源，電流為2-10mA/管，時間為1.5-2h。

2.如權利要求1所述的改良凝膠電泳檢測血清中低密度脂蛋白的方法，其特征在于：所述步驟2中使用的染液為蘇丹黑B染液。

3.如權利要求2所述的改良凝膠電泳檢測血清中低密度脂蛋白的方法，其特征在于：所述蘇丹黑B染液的制備方法包括取0.25g蘇丹黑B和25ml乙二醇混合，在50-60℃加熱5min，加熱時不斷攪拌，之后升溫至100-110℃，加熱5min，趁熱使用0.22um膜過濾，待冷卻后，再用0.22um膜過濾一次，之后加入15ml蔗糖，混勻后避光保存。

4.如權利要求1或2所述的改良凝膠電泳檢測血清中低密度脂蛋白的方法，其特征在于：所述步驟3中在加入分離膠之后緩慢注入100uL蒸餾水覆蓋分離膠的表面，靜置30min以上，待凝膠聚合平整后去掉水層。

5.如權利要求1或2所述的改良凝膠電泳檢測血清中低密度脂蛋白的方法，其特征在于：所述步驟3中在加入濃縮膠之后緩慢注入100uL蒸餾水覆蓋分離膠的表面，靜置30min以上，待凝膠聚合平整后去掉水層。

6.如權利要求1或2所述的改良凝膠電泳檢測血清中低密度脂蛋白的方法，其特征在于：所述步驟3中使用的分離膠的制備方法包括取0.857ml的35％的N,N′-亞甲基雙丙烯酰胺、2.5ml的1.5M pH8.8 Tris-HCl、0.1ml的10％APS、0.01ml的TEMED以及6.533ml的H2O。

7.如權利要求1或2所述的改良凝膠電泳檢測血清中低密度脂蛋白的方法，其特征在于：所述步驟3中使用的濃縮膠的制備方法包括體積比為1:2:1:4的溶液A、溶液B、溶液C和溶液D；

其中溶液A的制備方法包括取濃度為1mol/L的HCL 48ml、Tris 5.98g、TEMED 0.46mL,加水至100mL,調節pH至6.7；

溶液B的制備方法包括取丙烯酰胺10.0g，N,N′-亞甲基雙丙烯酰胺2.5g，加水至100mL；

溶液C的制備方法包括取核黃素4mg，加水至100mL；

溶液D的制備方法包括取蔗糖40g，加水至100mL。

8.如權利要求1或2所述的改良凝膠電泳檢測血清中低密度脂蛋白的方法，其特征在于：所述步驟4中在正極槽內注入550-600ml的電泳緩沖液，在負極槽內注入400-500ml的電泳緩沖液。

9.如權利要求1或2所述的改良凝膠電泳檢測血清中低密度脂蛋白的方法，其特征在于：所述步驟4中使用的電泳緩沖液的制備方法包括取80-100mM的Tris，70-90mM的硼酸和2-4mM的EDTA混合均勻，調節PH至8.3。