[發明專利]一種促進臍帶血干細胞成骨分化的組合物及其應用

有效

• 申請號: 202110114416.6
• 申請日: 2021-01-28
• 公開（公告）號: CN112430269B
• 公開（公告）日: 2021-04-20
• 發明（設計）人: 張濤;陳博
• 申請（專利權）人: 中賽干細胞基因工程有限公司
• 主分類號: C07K16/18
• 分類號: C07K16/18;C12N15/13;C12N15/85;C12N5/077
• 代理公司: 成都魚爪智云知識產權代理有限公司 51308
• 代理人: 趙晨宇

本發明涉及一種促進臍帶血干細胞成骨分化的組合物及其應用。本發明制備獲得了骨硬化蛋白特異性的單克隆抗體，所述單克隆抗體能夠特異性的促進干細胞向成骨分化的同時還能夠在二種干細胞中弱促進細胞的增殖，具有較好的應用前景。

技術領域

本發明涉及生物領域，具體的涉及一種促進臍帶間充質干細胞向成骨分化的方法及其組合物和應用。

背景技術

骨相關疾病是近年來發病率升高較快的病種。而骨組織工程的進步為骨缺損修復提供了新的思路，在一定程度上克服了傳統骨缺損修復所存在的缺點，如免疫排斥反應、二次損傷、可移植部位及數量有限等。骨組織工程的關鍵之一是選擇合適的種子細胞。近十幾年的研究發現，臍帶血中含有可以重建人體造血和免疫系統的造血干細胞，可用于造血干細胞移植，治療80多種疾病。相對于骨髓內的干細胞，進行臍帶血干細胞移植所引發的后遺癥更低，而且干細胞的排斥概率也低。成骨細胞時骨形成的主要功能細胞，負責骨基質的合成、分泌和礦化。骨不斷地進行著重建，骨重建過程包括破骨細胞貼附在舊骨區域，分泌酸性物質溶解礦物質，分泌蛋白酶消化骨基質，形成骨吸收陷窩；其后，成骨細胞移行至被吸收部位，分泌骨基質，骨基質礦化形成新骨。成骨細胞在骨形成過程中要經歷成骨細胞增殖，細胞外基質成熟、細胞外基質礦化和成骨細胞凋亡4個階段。很多因素可調節這幾個階段，從而最終調控骨形成。干細胞骨分化是骨骼細胞再生的重要環節，干細胞分化成骨組織用以進行移植研究和潛在治療具有重要的價值。

臍帶等結構在女性生產后，常作為醫療廢棄物處置，這極為可惜，因為臍血有很多具有多向分化能力的干細胞，除了造血干細胞，間充質干細胞也可在體內外分化為成骨細胞、軟骨細胞和脂肪細胞。

目前，關于臍帶間充質干細胞成骨分化的研究已比較多。許多胞外成分可引導間充質干細胞向成骨細胞分化，如骨形成蛋白2、成纖維細胞生長因子、轉化生長因子β、胰島素樣生長因子、力生長因子等，但較常用的方法為地塞米松、β-甘油磷酸鈉、抗壞血酸共同促間充質干細胞成骨分化。其中地塞米松可以促進間充質干細胞堿性磷酸酶活性增強，早期促基質合成，后期促鈣化; β-甘油磷酸鈉迅速水解生成磷酸根離子，可作為堿性磷酸酶的底物，促進鈣鹽沉積; 抗壞血酸可以促進細胞合成膠原，形成鈣化。有研究表明，干細胞所處的微環境對細胞分化起著正向或者負向調節作用，骨損傷過程的局部為炎性微環境，炎性細胞因子是否對干細胞成骨分化存在促進或抑制作用。有研究表明， IL-10等細胞因子可抑制破骨細胞活性、加速成骨，但是也有研究者提出IL-6 促進破骨細胞增殖和活性。成骨細胞和破骨細胞都是已經分化的細胞，而各類細胞因子是否影響原始的多能間充質干細胞分化成為成骨細胞、對骨修復進行支持是有爭議的。研究也表明細胞因子TNF-α， IL-6和IL-4 在人類臍血來源間充質干細胞的成骨分化中的促進作用。

此前研究也表明，骨硬化蛋白可通過與Wnt通路中Lrp5/6結合，抑制Wnt/β-catenin通路的活化，對骨形成起負性調控作用。動物實驗證明拮抗骨硬化蛋白在增加骨量，改善骨強度和骨折愈合都有很好的效果,通過骨硬化蛋白單鏈抗體作用與骨髓間充質干細胞，發現對細胞增殖作用不明顯，但可以促進成骨分化，為拮抗骨硬化蛋白治療骨質疏松癥的臨床應用提供了新的思路。但是目前，還有拮抗骨硬化蛋白來研究其他干細胞向成骨分化的研究。

發明內容

本發明的目的是提供一種能夠快速促進臍帶血干細胞增殖的同時還能促進其誘導分化為成骨細胞的方法。發明內容

本發明的目的是提供一種能夠快速促進干細胞增殖的同時還能促進其誘導分化為成骨細胞的方法。

具體的本發明針對骨硬化蛋白，篩選獲得了特異性的單克隆抗體。

更具體的，所述單克隆抗體的序列為：

輕鏈可變區(SEQ ID NO:1)