[發(fā)明專利]一種催化乙苯等烷基苯及衍生物羥化的突變體及其應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202110109833.1
• 申請日: 2021-01-26
• 公開（公告）號: CN113106074B
• 公開（公告）日: 2022-11-29
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 叢志奇;陳杰;劉傳飛
• 申請（專利權(quán)）人: 中國科學(xué)院青島生物能源與過程研究所
• 主分類號: C12N9/02
• 分類號: C12N9/02;C12P7/22
• 代理公司: 沈陽科苑專利商標(biāo)代理有限公司 21002
• 代理人: 李穎

1.一種催化乙苯等烷基苯及衍生物羥化的突變體，其特征在于：突變體為細(xì)胞色素P450BM3氧化酶第87位苯丙氨酸處和第268位蘇氨酸處的兩個(gè)位點(diǎn)突變；所述突變體為：F87A-T268P、F87G-T268I-V78M、F87G-T268I-V78C、F87A-T268V-A82C、F87A-T268V-A82L、F87A-T268V- A82C-V78L、F87A-T268V- A82C-V78I。

2.一種表達(dá)載體，其特征在于：表達(dá)載體含權(quán)利要求1所述任意一項(xiàng)突變體。

3.一種基因工程菌，其特征在于：基因工程菌含有權(quán)利要求2所述的表達(dá)載體。

4.一種權(quán)利要求1所述的突變體的應(yīng)用，其特征在于：所述權(quán)利要求1任意一項(xiàng)所述突變體在催化烷基苯及其衍生物羥化合成光學(xué)純的(S)/(R)-苯基烷基醇中的應(yīng)用。

5.按權(quán)利要求4所述的突變體的應(yīng)用，其特征在于：所述催化體系為雙功能小分子化合物、所述突變體、H₂O₂和底物；其中，雙功能小分子化合物為N-(ω-咪唑基，脂肪酰基)-L-苯丙氨酸衍生物。

6.一種協(xié)同選擇性催化烷基苯及衍生物羥化合成光學(xué)純的(S)/(R)-苯基烷基醇的方法，其特征在于：利用具有雙功能的小分子N-(ω-咪唑基，脂肪酰基)-L-苯丙氨酸衍生物誘導(dǎo)所述權(quán)利要求1所述的突變體，實(shí)現(xiàn)通過H₂O₂對烷基苯及衍生物的sp3 C-H鍵的選擇性羥化調(diào)控，進(jìn)而合成光學(xué)純的(S)/(R)-苯基烷基醇。

7.按權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于：利用雙功能小分子化合物Im-C6-Phe/Im-C5-Phe誘導(dǎo)所述P450酶的氧化結(jié)構(gòu)域突變體實(shí)現(xiàn)利用H₂O₂對乙苯等烷基苯及衍生物的sp3 C-H鍵進(jìn)行高效區(qū)域及立體選擇性羥化生成(R)-苯基烷基醇；

或，

利用雙功能小分子化合物Im-C5-Phe誘導(dǎo)所述P450酶的氧化結(jié)構(gòu)域突變體實(shí)現(xiàn)利用H₂O₂對乙苯等烷基苯及衍生物的sp3 C-H鍵進(jìn)行高效區(qū)域及立體選擇性羥化生成(S)-苯基烷基醇。