[發明專利]一種用于結直腸癌類器官培養的培養液及其制備方法

有效

• 申請號: 202110109040.X
• 申請日: 2021-01-27
• 公開（公告）號: CN112813028B
• 公開（公告）日: 2022-07-15
• 發明（設計）人: 游明亮;王磊;申重陽
• 申請（專利權）人: 杭州艾名醫學科技有限公司
• 主分類號: C12N5/09
• 分類號: C12N5/09
• 代理公司: 北京輕創知識產權代理有限公司 11212
• 代理人: 姚曉麗

本發明公開了一種用于結直腸癌類器官培養的培養液及其制備方法，屬于生物醫藥技術領域。該培養液由如下原料制成：伊卡倍特鈉，維生素P4，人重組蛋白R?Spond i n 1，頭蛋白，人重組蛋白rhEGF，4?羥乙基哌嗪乙磺酸，L?丙氨酰?L?谷氨酰胺，青鏈雙抗，N2添加劑，B27添加劑，N?乙酰?L?半胱氨酸，Al k抑制劑A83?01，4?(4?氟苯基)?2?(4?羥基苯基)?5?(4?吡啶基)?1H?咪唑，胃泌素，非必需氨基酸溶液，煙酰胺和Advanced DMEM/F?12培養基。本發明的培養液能使結直腸癌組織細胞在培養的過程中能夠保持非常高的細胞和組織活性，更好地表現其固有的病理特征。

技術領域

本發明涉及一種用于結直腸癌類器官培養的培養液及其制備方法，屬于生物醫藥技術領域。

背景技術

結直腸癌是最常見的嚴重威脅人類健康的惡性腫瘤之一。在我國結直腸癌的發病率為在所有惡性腫瘤中占第三位。而結直腸癌的死亡率在全部惡性腫瘤中占第五位。隨著經濟的發展、生活水平的提高和生活方式的改變，結直腸癌的發病率還將呈不斷上升的趨勢。

結直腸癌是一種復雜疾病，其發生、發展是一個動態的過程，涉及到諸多信號分子相互作用，形成了一個復雜的分子調控網絡，同時還受到外界環境因素的影響，結直腸癌的病因和發生發展過程有很強的個體差異性，不能一概而論。

目前人們對結直腸癌病理生物學的基本機制了解甚少，并且治療效率和患者生存率并未顯著著改善，主要是由于缺乏合適的研究模型。類器官技術是一種強大的體外建模和研究人類癌癥的研究工具。它利用手術中獲取的癌組織在體外培養，通過在體外自組裝三維(3D)重建，獲得的類器官能夠再現原始組織的病理生物學關鍵特征，并且能夠進行結直腸癌的功能性測試以及藥物篩選。患者來源的癌組織類器官是研究結直腸癌的病理生物學特性以及用于(個性化)藥物篩選的先進的臨床前工具。

研究表明，腫瘤類器官本身的生長速度慢于其相應的正常組織類器官生長速度，甚至在許多情況下以較慢的速率生長，這可能與失敗的有絲分裂和分裂之后的細胞死亡有關。因此，在腫瘤類器官培養過程中需要避免殘存正常組織的上皮類器官在腫瘤類器官中過度生長，并且必須使用純腫瘤細胞樣本或者在選擇性培養條件下培養腫瘤類器官。

鑒于此，有必要開發一種用于結直腸癌類器官培養的培養液及其制備方法，以解決現有技術的不足。

發明內容

本發明的目的之一，是提供一種用于結直腸癌類器官培養的培養液。本發明的培養液包含了多種針對人結直腸癌組織細胞培養所需的細胞因子、信號通路調控因子、氨基酸和無血清添加劑等，各種細胞因子及調控因子相互直接密切影響，協調配合，使得結直腸癌組織細胞在培養的過程中能夠保持非常高的細胞和組織活性，更好地表現其固有的病理特征，并且與原組織的病理生物學特征和直腸癌腫瘤高頻突變基因保持高度一致。

本發明解決上述技術問題的技術方案如下：一種用于結直腸癌類器官培養的培養液，每50mL培養液由如下原料制成：伊卡倍特鈉，終濃度為1μg/mL-100μg/mL；維生素P4，終濃度為1μM-100μM；人重組蛋白R-Spondin 1，終濃度為30ng/mL-50ng/mL；頭蛋白，終濃度為80ng/mL-100ng/mL；人重組蛋白rhEGF，終濃度為8ng/mL-10ng/mL；4-羥乙基哌嗪乙磺酸，終濃度為1mM；L-丙氨酰-L-谷氨酰胺，終濃度為1×；青鏈雙抗，終濃度1×；N2添加劑，終濃度為1×；B27添加劑，終濃度為1×；N-乙酰-L-半胱氨酸，終濃度為0.09mM-0.125mM；Alk抑制劑A83-01，終濃度為0.3μM-0.5μM；4-(4-氟苯基)-2-(4-羥基苯基)-5-(4-吡啶基)-1H-咪唑，終濃度為0.3μM-0.5μM；胃泌素，終濃度為10nM；非必需氨基酸溶液，終濃度為1×；煙酰胺，終濃度為5mM和Advanced DMEM/F-12培養基補足至50mL。

本發明的用于結直腸癌類器官培養的培養液的原理是：