[發明專利]中和抗體高敏檢測方法及產品

有效

• 申請號: 202110104780.4
• 申請日: 2021-01-26
• 公開（公告）號: CN113156129B
• 公開（公告）日: 2022-04-05
• 發明（設計）人: 夏良雨;潘少麗;覃麗芳;岑靜;鄧盛花;范名俊
• 申請（專利權）人: 廣東菲鵬生物有限公司
• 主分類號: G01N33/58
• 分類號: G01N33/58;G01N33/569;G01N33/558;G01N33/543
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本發明涉及抗體檢測領域，具體涉及抗體檢測方法及產品，應用在中和抗體檢測上具有更高的靈敏度，本發明方案還可進一步檢測總抗體，在當前新冠病毒中和抗體及總抗體檢測中具有廣闊的市場應用價值。本發明提供的檢測方法包括步驟：樣品與含配體的片段、試劑1、試劑2接觸；其中，試劑1或試劑2中的一種連接有標記物，另一種固定于固相載體。

技術領域

本發明涉及抗體檢測領域，具體而言，涉及抗體檢測方法及產品。

背景技術

受體配體結合是實現信號傳導的通道之一，受體能夠識別和特異性結合配體。以病原體入侵宿主細胞為例，病原體表面的配體能夠與宿主細胞上的受體結合，打開侵染宿主細胞的大門。

但是面對全新的病毒，相關的基礎研究較多機制研究不透徹的背景下，大量的疫苗設計快速進入臨床，在疫苗的有效性、保護周期、質量控制、可及性上仍在有較多的內容需要進一步研究。

國內第一批疫苗主要為滅活疫苗，然而滅活疫苗采用的BPL滅活，Spike蛋白存在較高比例的融合后構象以及RBD“down”構象，在初步的免疫人群分析中，發現總抗體水平應答相對較低且中和抗體滴度不高的跡象。

另外，從現有的新冠基礎研究來看，并非所有個體感染新冠之后會產生足夠滴度的中和抗體，存在二次感染風險。中和抗體滴度在1個月達到峰值后會逐步下降，少部分低滴度康復者會降至檢測限以下。參考其他冠狀病毒，新冠抗體存在的時間可能在1-2年左右，并不能形成長效保護。

SARS-CoV-2的中和抗體可以通過阻斷或抑制SARS-CoV-2與宿主細胞之間的相互作用來有效的控制感染。其中研究最為透徹的機制為SARS-CoV-2刺突Spike蛋白S1亞基上的受體結合區(Receptor Binding Domain,RBD)和宿主細胞受體ACE2的相互作用及后續的構象轉變及膜融合。ACE2又稱ACEH，名為血管緊張素轉化酶2，是一種金屬蛋白酶，全長805個氨基酸，是具有單一胞外催化結構域的I型跨膜糖蛋白。

目前部分疫苗顯示出免疫后中和抗體陽轉率和滴度偏低的跡象。此外，SARS-CoV-2作為RNA病毒，變異頻率非常高，恢復期血清和疫苗的中和效果對部分突變顯示出更低的中和能力，這部分突變的積累可能導致免疫逃逸的發生。因此對中和抗體檢測的靈敏度提出了更高的要求。

為此，提出本發明。

發明內容

本發明提供了以下至少一種實施方式：

在一些實施方式中，本發明涉及檢測方法，包括步驟：

(1)樣品與含配體的片段、試劑1、試劑2接觸；

試劑1：包括所述配體的受體；

試劑2：包括結合所述配體的抗體，其中所述抗體與受體發生競爭；

其中，所述試劑1或試劑2中的一種連接有標記物，另一種固定于固相載體；

(2)檢測信號。

在一些實施方式中，所述接觸方式包括以下任意一種：

(a)樣品同時與含配體的片段、試劑1、試劑2接觸；

(b)樣品先與含配體的片段、試劑1接觸，再與試劑2接觸；

(c)樣品先與含配體的片段、試劑2接觸，再與試劑1接觸；

(d)樣品先與含配體的片段接觸，再與試劑1、試劑2接觸；

(e)樣品先與含配體的片段接觸，再與試劑1接觸，再與試劑2接觸；

(f)樣品先與含配體的片段接觸，再與試劑2接觸，再與試劑1接觸。

在一些實施方式中，所述配體為病原體入侵宿主細胞的配體。