[發明專利]一種造血干細胞凍存液及凍存方法

在審

• 申請號: 202110099853.5
• 申請日: 2021-01-25
• 公開（公告）號: CN112841173A
• 公開（公告）日: 2021-05-28
• 發明（設計）人: 趙麗歌;張少蘋
• 申請（專利權）人: 趙麗歌
• 主分類號: A01N1/02
• 分類號: A01N1/02
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明公開了一種造血干細胞凍存液，包括基礎培養基和添加劑，所述添加劑的成分以終濃度計包括：大米蛋白8?12μg/mL、舒布硫胺2?8μg/mL、香豆素5?10μg/mL、氨基甲酸乙酯10?15μg/mL、甘露醇20?30μg/mL、維生素C10?15ng/mL、柚皮苷11?18ng/mL。本發明提供的造血干細胞凍存液不添加DMSO，通過大米蛋白、舒布硫胺、香豆素、氨基甲酸乙酯、甘露醇、維生素C和柚皮苷的協同作用，提高造血干細胞在?80℃的保存條件下的存活率，細胞復蘇后容易和造血干細胞分離，無細胞毒性，提高了造血干細胞臨床應用的安全性。本發明還提供了一種造血干細胞的凍存方法，采用本發明提供的凍存液，在?80℃下實現造血干細胞的凍存，操作簡便，易于推廣應用。

技術領域

本發明涉及一種凍存液，尤其涉及一種造血干細胞凍存液及凍存方法。

背景技術

造血干細胞(Hematopoietic stem cells,HSCs)是血液系統中的成體干細胞，是一個異質性的群體，具有長期自我更新的能力和分化成各類成熟血細胞的潛能。它是研究歷史最長且最為深入的一類成體干細胞，對研究各類干細胞，包括腫瘤干細胞，具有重要指導意義。血液系統中的成熟細胞壽命極短，因此在人的一生中，造血干細胞需要根據機體的生理需求適時的補充血液系統各個成熟細胞組分。同時在損傷、炎癥等應激狀態下，造血干細胞也扮演著調節和維持體內血液系統各個細胞組分的生理平衡的角色。

造血干細胞在臨床上應用極為廣泛，造血干細胞凍存是保證造血干細胞移植成功的關鍵技術之一，凍存干細胞的效率高低直接影響移植成功率，造血干細胞從從采集到回輸可能經歷數日至數月，需選擇恰當的細胞凍存液，能有效保持被凍存細胞活性。在造血干細胞的凍存中，使用的凍存劑及方法均非常重要。目前臨床造血干細胞凍存有-196℃液氮程控降溫保存和-80℃非程控降溫保存，前者能長期保存且細胞損傷少，一般可保存23～25年，但操作復雜、設備昂貴，解凍后有細胞凝集現象，后者可保存干細胞1～2年，其操作相對簡便、費用低，但保存細胞活性無法保證。

目前造血干細胞的凍存液多以動物血清、非臨床應用級試劑、高比例二甲基亞砜(DMSO)配制而成。動物血清和非臨床應用級試劑會帶來很多未知的風險，安全性較差。DMSO是一種穿透性保護劑，常溫下對造血干細胞等組織細胞有一定毒性，在向患者輸入含≥5％DMSO的凍存干細胞時，可引起不同程度的高血壓/低血壓、心慌胸悶、心率失常等副作用。因此尋找一種安全、無毒且能保證造血干細胞活性的凍存液顯得尤為重要。

發明內容

為了克服現有技術的不足，本發明的目的之一在于提供一種造血干細胞凍存液，不添加DMSO，提高凍存液安全性同時保證細胞凍存后的存活率。

本發明的目的之二在于提供一種造血干細胞的凍存方法。

本發明的目的之一采用如下技術方案實現：

一種造血干細胞凍存液，包括基礎培養基和添加劑，所述添加劑的成分以終濃度計包括：大米蛋白8-12μg/mL、舒布硫胺2-8μg/mL、香豆素5-10μg/mL、氨基甲酸乙酯10-15μg/mL、甘露醇20-30μg/mL、維生素C10-15ng/mL、柚皮苷11-18ng/mL。

進一步地，所述造血干細胞凍存液，包括基礎培養基和添加劑，所述添加劑的成分以終濃度計包括：大米蛋白10μg/mL、舒布硫胺5μg/mL、香豆素8μg/mL、氨基甲酸乙酯12μg/mL、甘露醇25μg/mL、維生素C12ng/mL、柚皮苷15ng/mL。

進一步地，所述基礎培養基為RPMI-1640。

本發明的目的之二采用如下技術方案實現：

一種造血干細胞的凍存方法，采用上述的凍存液凍存。

進一步地，所述造血干細胞的凍存方法包括以下步驟：