[發(fā)明專利]豬偽狂犬病毒的PMA-qPCR檢測方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202110099182.2
• 申請日: 2021-01-25
• 公開（公告）號(hào): CN112695137A
• 公開（公告）日: 2021-04-23
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 湯細(xì)彪;黃超;龍?jiān)浦?/a>;李倩倩;宋文博;黃英;劉錦錦;楊柳;梁鞏
• 申請（專利權(quán)）人: 武漢科前生物股份有限公司
• 主分類號(hào): C12Q1/70
• 分類號(hào): C12Q1/70;C12Q1/686
• 代理公司: 北京路浩知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11002
• 代理人: 錢云

1.一種豬偽狂犬病毒的PMA-qPCR檢測方法，其特征在于，qPCR擴(kuò)增的引物是：

上游引物：5’-TTTGGATCCATGCGGCCCTTTCTG-3’，

下游引物：5’-TTTGAATTCTTACGACACGGCGTCGCA-3’。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的PMA-qPCR檢測方法，其特征在于，PMA工作液的終濃度為50-100μM。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的PMA-qPCR檢測方法，其特征在于，病毒液的稀釋倍數(shù)為10-1000。

4.根據(jù)權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)所述的PMA-qPCR檢測方法，其特征在于，所述PMA工作液與所述豬偽狂犬病毒液混合均勻，避光處理13-15min，間隔3-5min搖晃一次，再置于100W藍(lán)光燈下照射18-20min，間隔3-5min搖晃一次。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的PMA-qPCR檢測方法，其特征在于，所述PMA工作液是PMA染料溶解于二甲基亞砜中混合均勻得到的。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的PMA-qPCR檢測方法，其特征在于，所述qPCR擴(kuò)增的反應(yīng)體系包括：DNA熒光染料、DNA聚合酶和PCR反應(yīng)液、待測樣品的DNA、陰性對照品。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的PMA-qPCR檢測方法，其特征在于，所述反應(yīng)體系包括：2×AceQqPCR SYBR Green Master Mix、上游引物、下游引物、50×ROX Reference Dye 1、TemplatecDNA、去離子水。

8.根據(jù)權(quán)利要求1-7任一項(xiàng)所述的PMA-qPCR檢測方法，其特征在于，PMA-qPCR檢測結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn)如下：

樣本Ct值≤35，判斷樣本為陽性；

35＜樣本Ct值≤40，若擴(kuò)增曲線對數(shù)擴(kuò)增曲線，判斷為可疑陽性樣本，否則判斷樣本為陰性；

對可疑陽性樣本進(jìn)行復(fù)檢，若復(fù)檢樣本Ct值≤35，判斷可疑陽性樣本為陽性，否則判斷樣本為陰性；

樣本無Ct值或Ct值＞40，判斷樣本為陰性。

9.權(quán)利要求1-8任一項(xiàng)所述的PMA-qPCR檢測方法在制備豬偽狂犬病毒生物制品中的應(yīng)用。

10.權(quán)利要求1-8任一項(xiàng)所述的PMA-qPCR檢測方法在豬偽狂犬病毒疫苗質(zhì)量檢測中的應(yīng)用。