[發(fā)明專利]一種檢測抗體親和力的方法、系統(tǒng)及其應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202110099159.3
• 申請(qǐng)日: 2021-01-25
• 公開（公告）號(hào): CN112903646B
• 公開（公告）日: 2023-04-28
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 姜晶
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 上海睿鈺生物科技有限公司
• 主分類號(hào): G01N21/64
• 分類號(hào): G01N21/64
• 代理公司: 北京品源專利代理有限公司 11332
• 代理人: 鞏克棟

1.一種檢測抗體親和力的方法，其特征在于，所述方法包括如下步驟：

獲取孔板中待測樣品的顯微圖像，所述待測樣品為靶細(xì)胞與候選抗體混合并孵育后，再加入攜帶熒光標(biāo)記A的二抗混合并孵育后得到的細(xì)胞樣品，所述待測樣品的顯微圖像經(jīng)與所述熒光標(biāo)記A匹配的熒光激發(fā)光激發(fā)后進(jìn)行顯微成像得到；

分析所述待測樣品的顯微圖像，得到所述待測樣品的圖像分析結(jié)果；

基于所述待測樣品的圖像分析結(jié)果確定所述候選抗體的親和力；

所述獲取孔板中待測樣品的顯微圖像包括：通過高通量細(xì)胞分析系統(tǒng)的顯微成像模塊對(duì)孔板上各孔中的待測樣品分別進(jìn)行拍攝，得到各待測樣品的顯微圖像；

或者，通過高通量細(xì)胞分析系統(tǒng)的控制樣品自動(dòng)更換模塊更新孔板，再由顯微成像模塊對(duì)更新后的孔板上的待測樣品進(jìn)行拍攝，得到所述更新后的孔板上的待測樣品的顯微圖像；

所述方法還包括：通過高通量細(xì)胞分析系統(tǒng)的分析處理模塊識(shí)別所述顯微圖像中的抗體結(jié)合細(xì)胞和細(xì)胞，根據(jù)識(shí)別結(jié)果得到抗體結(jié)合細(xì)胞數(shù)，并根據(jù)所述抗體結(jié)合細(xì)胞數(shù)和總細(xì)胞數(shù)得到所述抗體結(jié)合細(xì)胞數(shù)占所述總細(xì)胞數(shù)的百分比；

所述方法還包括：通過高通量細(xì)胞分析系統(tǒng)的分析處理模塊分別確定顯微圖像中每個(gè)抗體結(jié)合細(xì)胞的熒光強(qiáng)度，根據(jù)各熒光強(qiáng)度和顯微圖像中的總細(xì)胞數(shù)，得到各所述抗體結(jié)合細(xì)胞的平均熒光強(qiáng)度；

所述方法還包括構(gòu)建擬合曲線確定所述候選抗體的親和力；

所述擬合曲線由高通量細(xì)胞分析系統(tǒng)的分析處理模塊進(jìn)行擬合，所述擬合的方法為：以所述候選抗體的濃度、平均熒光強(qiáng)度/抗體結(jié)合細(xì)胞數(shù)/抗體結(jié)合細(xì)胞數(shù)占總細(xì)胞數(shù)的百分比為變量，得到反映抗體親和力的劑量依賴曲線圖；

所述方法還包括：基于量-效關(guān)系方程擬合得到反映抗體親和力的劑量依賴曲線：

Y＝Bottom+(Top-Bottom)/(1+10^((Log?EC50-X)*Hill?Slope)

X表示候選抗體的濃度；

Y表示候選抗體在X濃度下，待測樣品的平均熒光強(qiáng)度/抗體結(jié)合細(xì)胞數(shù)/抗體結(jié)合細(xì)胞數(shù)占總細(xì)胞數(shù)的百分比；

Bottom表示陰性對(duì)照孔中待測樣品的平均熒光強(qiáng)度/抗體結(jié)合細(xì)胞數(shù)/抗體結(jié)合細(xì)胞數(shù)占總細(xì)胞數(shù)的百分比；

Top表示陽性對(duì)照孔中待測樣品的平均熒光強(qiáng)度/抗體結(jié)合細(xì)胞數(shù)/抗體結(jié)合細(xì)胞數(shù)占總細(xì)胞數(shù)的百分比；

EC50表示能引起50％個(gè)體有效的候選抗體濃度；

Hill?Slope為斜率，通過至少兩組XY數(shù)據(jù)求解得到；

所述孔板有多個(gè)樣品孔，所述候選抗體至少包括兩種類型；

所述多個(gè)樣品孔中同一類型的候選抗體至少包括兩個(gè)濃度；

所述靶細(xì)胞包括攜帶熒光標(biāo)記B的靶細(xì)胞，所述熒光標(biāo)記A和熒光標(biāo)記B所匹配的熒光激發(fā)光不同；

所述方法還包括獲取所述熒光標(biāo)記B匹配的熒光激發(fā)光激發(fā)后得到的待測樣品的顯微圖像；

所述方法還包括：針對(duì)分別在與熒光標(biāo)記A匹配的熒光通道下拍攝的待測樣品的第一顯微圖像和與熒光標(biāo)記B匹配的熒光通道下拍攝的所述待測樣品的第二顯微圖像，對(duì)所述第一顯微圖像和所述第二顯微圖像進(jìn)行對(duì)比，根據(jù)對(duì)比結(jié)果確定各細(xì)胞中的當(dāng)前細(xì)胞在所述第一顯微圖像和所述第二顯微圖像中的位置信息是否一致。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述候選抗體通過梯度稀釋得到不同濃度。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述待測樣品的圖像分析結(jié)果包括：平均熒光強(qiáng)度、總細(xì)胞數(shù)、抗體結(jié)合細(xì)胞數(shù)或抗體結(jié)合細(xì)胞數(shù)占總細(xì)胞數(shù)的百分比中的任意一種或至少兩種的組合。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述靶細(xì)胞與候選抗體混合前，獲取所述靶細(xì)胞的顯微圖像并基于所述靶細(xì)胞的顯微圖像確定所述靶細(xì)胞的數(shù)量。