[發明專利]一種酶處理輔助提取微擬球藻EPA極性脂的方法

有效

• 申請號: 202110097284.0
• 申請日: 2021-01-25
• 公開（公告）號: CN112795423B
• 公開（公告）日: 2023-01-17
• 發明（設計）人: 張立偉;鄭竟成;田華;何東平;張四紅;雷芬芬;趙康宇;張美蘭
• 申請（專利權）人: 武漢輕工大學
• 主分類號: C11B1/02
• 分類號: C11B1/02;C11B1/10;C11B3/00
• 代理公司: 武漢華之喻知識產權代理有限公司 42267
• 代理人: 彭翠;曹葆青

本發明涉及生物技術領域，具體涉及一種酶處理輔助提取微擬球藻EPA極性脂的方法。包括如下步驟：步驟一、利用漆酶處理微擬球藻，得到微擬球藻酶解混懸液；步驟二、將所述微擬球藻酶解混懸液經離心，去除上層清液，取下層沉淀烘干干燥，即得微擬球藻酶解破壁藻粉；步驟三、將所述微擬球藻破壁藻粉進行亞臨界萃取，得到微擬球藻極性脂提取液；步驟四、將微擬球藻極性脂提取液經離心，取上層清液，經真空蒸發去除溶劑，即得微擬球藻EPA極性脂。該微擬球藻EPA極性脂的制備工藝安全，方法便捷，且EPA極性脂提取率相對于現有技術顯著提高。

技術領域

本發明涉及生物技術領域，具體涉及一種酶處理輔助提取微擬球藻EPA極性脂的方法。

背景技術

二十碳五烯酸(Eicosapentaenoic Acid，EPA)，作為一種人體所無法合成的ω-3系列的多不飽和脂肪酸(Polyunsaturated fatty acids PUFAs)，具有預防老年癡呆、防止大腦功能衰退、增強免疫能力、抑制內源性膽固醇和甘油三酯的合成、增加脂蛋白脂酶的活性等生物活性。目前大多數的EPA產品主要以深海魚油、南極磷蝦油等作為原料提取。

微擬球藻細胞壁主要由纖維素、半纖維素、木質素組成，細胞壁為三層結構，強度是植物細胞壁的數倍，結構復雜且堅韌的細胞壁使有機溶劑的提取效率降低。為分解微藻細胞壁，可以選擇高壓均質化、超聲等機械法、酸水解法和酶解法進行細胞破碎。與其他方法相比，酶解法具有溫和的水解條件減少微藻中多不飽和脂肪酸的氧化、底物專一選擇性防止微藻細胞過度破碎、低能耗和設備簡單等優勢。

目前，國內外提取微藻脂質的方法主要有CO₂超臨界萃取法、有機溶劑萃取法等，但現有工藝提取的到的大多為微藻的總脂，且由于現有的工藝條件和技術限制，以及微擬球藻細胞壁的影響，暫時無法從微擬球藻中直接得到純度較高的EPA極性脂。

發明內容

針對現有技術的缺陷，本發明提供了一種酶處理輔助提取微擬球藻EPA極性脂的方法，通過對酶種類進行重新選擇，并對酶解工藝以及整體提取方法步驟進行重新設計和優化，最終打破了傳統微擬球藻細胞壁的影響，有效增加了微擬球藻極性脂提取率，以解決現有技術無法從微擬球藻中直接得到純度較高的EPA極性脂的技術問題。

為實現上述目的，本發明提供了一種酶處理輔助提取微擬球藻EPA極性脂的方法，包括如下步驟：

步驟一、將微擬球藻與酶和緩沖溶液混合進行酶解，得到微擬球藻酶解混懸液；所述酶包括漆酶；

步驟二、將所述微擬球藻酶解混懸液經離心，去除上層清液，取下層沉淀進行干燥，即得微擬球藻酶解破壁藻粉；

步驟三、將所述微擬球藻酶解破壁藻粉進行亞臨界萃取，即得微擬球藻極性脂提取液；

步驟四、將所述微擬球藻極性脂提取液經離心，取上層清液，經真空蒸發去除溶劑，即得微擬球藻含EPA極性脂。

優選地，步驟一所述酶包括漆酶和纖維素酶。

優選地，步驟一所述酶為漆酶-纖維素酶復合酶。

優選地，酶解時所述漆酶與纖維素酶的酶活性比為0.1～1.0U/ml:100～500U/ml。

優選地，所述緩沖溶液為pH＝4.2～5.8的檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖溶液，所述微擬球藻與緩沖溶液的固液比為1:5～10。

優選地，所述緩沖溶液為pH＝5.0～5.8的檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖溶液。

優選地，步驟一在40～60℃下酶解1～6小時。

優選地，步驟一在48～52℃下酶解2.8～3.2小時。

優選地，步驟二中離心條件為：離心轉速3000～4000r/min，離心時間10～20分鐘；干燥條件為：干燥溫度55～65℃，干燥時間8～16小時。