[發明專利]用于檢測希望山病毒、穆勒舒病毒和里約塞貢多病毒的引物探針組合、試劑盒及方法

有效

• 申請號: 202110096393.0
• 申請日: 2021-01-25
• 公開（公告）號: CN112746132B
• 公開（公告）日: 2022-09-20
• 發明（設計）人: 李建東;杜珊珊;李阿茜;梁米芳;李德新;王世文;黃曉霞;李川;王芹;孫麗娜;蕪為
• 申請（專利權）人: 中國疾病預防控制中心病毒病預防控制所
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/6851;C12N15/11
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 張璐

本發明涉及病毒檢測技術領域，具體涉及用于檢測希望山病毒、穆勒舒病毒和里約塞貢多病毒的引物探針組合、試劑盒及方法。本發明提供用于希望山病毒、穆勒舒病毒和里約塞貢多病毒的分別或同時實時熒光定量RT?PCR檢測的引物探針組合，其含有三對特異性引物和三條特異性探針，其中，所述特異性引物的序列如SEQ ID NO.1?6所示，所述特異性探針的序列如SEQ ID NO.7?9所示。本發明提供的引物探針組合和檢測方法具有較高的特異性和靈敏性，可重復性好，檢測簡便、快速具有實際應用價值。在新的人獸共患病不斷出現的形勢下，本發明在疾病的早發現、早診斷方面尤顯重要意義。

技術領域

本發明涉及病毒檢測技術領域，具體涉及用于檢測希望山病毒、穆勒舒病毒和里約塞貢多病毒的引物探針組合、試劑盒及方法。

背景技術

目前漢坦病毒在全世界分布廣泛，在人類中可以引起兩種疾病。一種是腎綜合征出血熱(HFRS)，主要由漢坦病毒(HTNV)和亞洲相關病毒引起，歐洲的普烏拉病毒(PUUV)和多布拉病毒(DOVB)，以及世界范圍的漢城病毒(SEOV)；另一種則是漢坦病毒肺綜合征(HCPS)，由辛諾姆布雷病毒(SNV)和北美相關病毒引起，以及安第斯病毒(ANDV)和拉丁美洲相關病毒，引起全球廣泛關注。

希望山病毒(Prospect Hill virus，PHV)、穆勒舒病毒(Muleshoe virus，MULEV)和里約塞貢多病毒(Rio Segundo virus，RIOSV)都屬于屬于布尼亞病毒目漢坦病毒科，是一種有包膜的單股負鏈RNA病毒，其基因組包括L、M、S三個節段，來源于S、L和M片段的多核苷酸分別編碼病毒核衣殼蛋白、核糖核酸依賴性核糖核酸聚合酶和糖蛋白前體。

希望山病毒最初是在美國馬里蘭州弗雷德里克捕獲的草地田鼠肺組織中分離出來的，但是感染并不局限于田鼠，而是在美國本土野生嚙齒類動物中廣泛存在，其3′端核苷酸序列類似于漢坦病毒和普馬拉維病毒，表明希望山病毒和普馬拉維病毒的結構蛋白(Gl、G2和N)相似。穆勒舒病毒(Muleshoe virus，MULEV)是由Rawlings等人在1996年德克薩斯州北部的鼠類動物中發現。里約塞貢多病毒最初是Hjelle等人在1995年哥斯達黎加中部的動物中被描述的，相關文獻報道來自嚙齒類動物的漢坦病毒可能比其他漢坦病毒更易于宿主轉換，極有可能造成來自一個主要宿主的外溢而在多個物種中傳播。它們都屬于新世界漢坦病毒，某些新世界漢坦病毒可引起漢坦病毒肺綜合征(HPS)，HPS引起的漢坦病毒被美國研究所列為A類病原體，全球每年發生超過50，000例病例，死亡率40％(HPS)，雖然目前并沒有發現這三種病毒感染人，但是嚙齒類動物傳播迅速，并不能排除感染人的可能性。

病毒病實驗室檢測主要依靠于病毒分離、血清學檢測和病毒核酸檢測。病毒核酸檢測主要是基于PCR技術，實時熒光定量RT-PCR有著快速、高靈敏度和特異度的優點，是目前運用較多的實驗室檢測方法。該方法基于熒光共振能量遷移的原理，通過對熒光強度變化監測產物量的變化，隨著反應時間的進行，將監測到的熒光信號的變化繪制一條曲線。該方法全程閉管操作，降低了污染的風險；對PCR產物除了可以進行定性分析，也可通過繪制標準曲線進行定量分析。

發明內容

本發明的目的在于提供一種靈敏、特異，可分別或同時檢測希望山病毒、穆勒舒病毒和里約塞貢多病毒的實時熒光定量RT-PCR引物探針組合、試劑盒及方法。