[發明專利]一種可響應降解DNA折紙礦化方法

在審

• 申請號: 202110092442.3
• 申請日: 2021-01-24
• 公開（公告）號: CN112898364A
• 公開（公告）日: 2021-06-04
• 發明（設計）人: 田野;劉鵬;閔乾昊;徐子棋;胡曉雪;戴李知
• 申請（專利權）人: 南京大學
• 主分類號: C07H23/00
• 分類號: C07H23/00;C07H1/00
• 代理公司: 江蘇德善律師事務所 32488
• 代理人: 何紅梅

1.一種可響應降解DNA折紙礦化方法，其特征在于包括如下步驟：(1)合成折紙結構，使用PEG離心技術進一步純化和濃縮；

(2)通過加入三甲基【3-(三甲氧基硅烷基)丙基】氯化銨TMAPS和雙[3-(三乙氧基甲硅烷基)丙基]四硫化物BTES從而實現在折紙的有效礦化；

(3)響應降解能力測試。

2.根據權利要求1所述的可響應降解DNA折紙礦化方法，其特征在于：在步驟(1)中，step1折紙三角片合成及提純；step2折紙三角片的分散及濃縮；

在步驟(2)中，step 1折紙三角片的合成效果及濃度檢測；step 2折紙三角片的礦化過程。

3.根據權利要求2所述的可響應降解DNA折紙礦化方法，其特征在于：在步驟(1)中，step1折紙三角片--合成及提純：

取PCR管，加入59.2微升純水，10微升125毫摩爾配制鎂鹽，10微升取自噬菌體的M13長鏈，濃度為100納摩爾每升，20.8微升已經預混的固定鏈，最終體系為100微升，將上述PCR管，投入到PCR中，實現從90攝氏度到20攝氏度的梯度降溫，經過兩個小時的組裝過程，取出PCR管；取上述合成完畢三角片折紙三管，使用移液槍轉移到1毫升離心管中，共計300微升折紙溶液，加入等體積的配制好20％濃度的PEG8000，總體系共計600微升，將上述溶液置于離心機內，選取轉速20000rcf，離心兩小時。

4.根據權利要求3所述的可響應降解DNA折紙礦化方法，其特征在于：在步驟(1)中，step 2折紙三角片的分散及濃縮：

吸取上層溶液，保留最底部的離心沉淀，加入20微升1毫摩爾每升氯化鎂溶液，使用渦輪震蕩10秒鐘，將上述溶液置于金屬混勻儀，程序設為800rcf，37.5攝氏度，震蕩16小時，將上述20微升溶液10管并入一管，使用移液槍進行操作，最終得到200微升三角片提純，濃縮后的溶液。

5.根據權利要求4所述的可響應降解DNA折紙礦化方法，其特征在于：在步驟(2)中，step 1折紙三角片的合成效果及濃度檢測：

使用AFM觀察，折紙三角片的合成情況，并使用紫外熒光光度計，測量堿基在260nm處的吸收峰值，從而按照堿基的雙鏈和單鏈個數計算出合成和提純過后的三角片的濃度。

6.根據權利要求2所述的可響應降解DNA折紙礦化方法，其特征在于：在步驟(2)中，step 2折紙三角片的礦化過程：

取上述溶液50微升，pH在8.5到9.5之間，按照堿基：TMAPS的摩爾比為1：5-1：20加入TMAPS，加入后的溶液置于金屬混勻儀，程序設為轉速500rcf左右，20攝氏度左右，震蕩20分鐘左右，取出上述溶液，按照堿基：BTES的摩爾比為1:10-1:40加入BTES，加入后的溶液置于金屬混勻儀，程序設為轉速500rcf，溫度20攝氏度左右，震蕩20分鐘；震蕩結束后，繼續在混勻儀上20攝氏度條件下，靜置24小時，生長完硅層的樣品置于離心機中20000rcf，90分鐘離心，吸取上層液體，留下底層沉淀；加入50微升純水，使用金屬混儀800rcf，37.5攝氏度震蕩2小時分散，將上述溶液置于離心機20000rcf，90分鐘離心；離心結束，吸取上層液體，留下底部沉淀，沉淀制得BTES礦化后的三角形折紙片。

7.根據權利要求1所述的可響應降解DNA折紙礦化方法，其特征在于：在步驟(3)中，取上述沉淀加入預配pH為6，鎂鹽濃度為12.5毫摩爾每升，GSH濃度為10毫摩爾每升溶液100微升，靜置反應，間隔時間梯度進行AFM表征觀察礦化后折紙三角片降解情況。