[發明專利]一種近紅外固態發光的熒光探針及其制備方法與應用

有效

• 申請號: 202110089529.5
• 申請日: 2021-01-22
• 公開（公告）號: CN112778288B
• 公開（公告）日: 2022-08-09
• 發明（設計）人: 張曉兵;李珂;袁林;宦雙燕
• 申請（專利權）人: 湖南大學
• 主分類號: C07D405/14
• 分類號: C07D405/14;C09K11/06;C12Q1/48
• 代理公司: 長沙永星專利商標事務所(普通合伙) 43001
• 代理人: 周詠;林毓俊

1.一種近紅外固態發光的熒光探針，其特征在于，其結構式如式Ⅰ所示：

；

所述的近紅外固態發光的熒光探針的制備方法，包括以下步驟：

（1）將化合物1和烏洛托品溶于三氟乙酸中，加熱條件下進行回流反應，反應結束后，加入鹽酸進行水解反應，反應結束后，過柱分離后，得到黃色中間體化合物2；

（2）將步驟（1）中的化合物2與2-氨基-5-氯苯甲酰胺及對甲苯磺酸在無水乙醇溶劑中進行回流反應，反應結束并冷卻后，向其中加入二氯二氰基苯醌，然后抽濾，得到紅色的固體，用乙醇洗滌固體，烘干即得固態熒光染料HYPQ；

（3）將化合物3溶于二氯甲烷中，在冰浴條件下加入DCC，進行初級反應，反應結束后，接著加入2-甲氨基哌啶，并漸漸升溫至室溫，進行反應，反應完畢后，抽濾掉生成的固體，濾液旋干，飽和碳酸氫鈉水溶液洗，二氯甲烷萃取，再調節pH到2~4，產物在水中，再將pH調到11~13，二氯甲烷萃取，旋干，泵0.5~2h，得到化合物4；

（4）在氮氣保護下，將步驟（2）中HYPQ溶于無水二氯甲烷和二甲亞砜中，在冰浴條件下中，加入DIPEA，并攪拌混勻，接著加入三光氣，常溫下攪拌反應，反應完畢后，真空泵抽出未反應的光氣；化合物4溶于無水二氯甲烷后加入反應體系，接著加入DIPEA繼續反應，反應完畢后，將反應液進行萃取收集有機相，有機相干燥后減壓旋蒸去掉萃取溶劑，得到粗產物化合物5，用二氯甲烷重新溶解化合物5，接著向其中加入三氟乙酸脫保護基，刮板提純產物，得到式Ⅰ所示的近紅外固態發光的熒光探針；

合成路線如下：

。

2.根據權利要求1所述的近紅外固態發光的熒光探針，其特征在于，所述步驟（1）中，化合物1、烏洛托的物質的量之比為1:(1～1.5)，化合物1與三氟乙酸的質量體積比為15~16mg/mL；加熱溫度為85~95℃，回流反應時間為2~4h；鹽酸的濃度為11~13 mol/L，相對化合物1的加入量為：150~160mg化合物1加入3~4mL鹽酸，水解反應時間為0.5~1.5h；過柱分離采用體積比為5:(3～1) 二氯甲烷和石油醚。

3.根據權利要求1所述的近紅外固態發光的熒光探針，其特征在于，所述步驟（2）中，化合物2、2-氨基-5-氯苯甲酰胺、對甲苯磺酸和二氯二氰基苯醌的物質的量之比為1:(1～1.5):(0.01～0.02):(1.5～3)；化合物2與無水乙醇的質量體積比為1~2mg/mL；回流反應時間為2~4h，回流反應溫度為80~85℃。

4.根據權利要求1所述的近紅外固態發光的熒光探針，其特征在于，所述步驟（3）中，化合物3，DCC和2-甲氨基哌啶的物質的量之比為1:(1～1.2):(1～1.1)；化合物3與二氯甲烷的質量體積比為3~6mg/mL；初級反應時間為10~20min；反應時間為15~17h。

5.根據權利要求1所述的近紅外固態發光的熒光探針，其特征在于，所述步驟（4）中，HYPQ，三光氣和化合物4的物質的量之比為1:4:(1～1.1)；二氯甲烷和二甲亞砜體積比為9~11:1，HYPQ與二氯甲烷和二甲亞砜混合溶劑的質量體積比為0.5~2mg/mL；HYPQ與第一次加入DIPEA的質量體積比為48~50mg/mL，HYPQ與第二次加入DIPEA的質量體積比48~50mg/mL；攪拌混勻時間為9~12min，常溫下攪拌反應時間為10~14h；化合物4溶于二氯甲烷后的濃度為8~10mg/mL；繼續反應時間為10~14h。

6.根據權利要求1~5中任意一項所述的近紅外固態發光的熒光探針在制備檢測體外緩沖液中酶活性的檢測試劑中的應用。

7.根據權利要求1~5中任意一項所述近紅外固態發光的熒光探針在制備檢測活細胞中成像細胞膜表面谷氨酰轉肽酶活性中檢測試劑中的應用。