[發明專利]一種酶催化復合微生態制劑

在審

• 申請號: 202110089472.9
• 申請日: 2021-01-22
• 公開（公告）號: CN112961795A
• 公開（公告）日: 2021-06-15
• 發明（設計）人: 姜德志;李抒陽
• 申請（專利權）人: 黑龍江雙發環?？萍加邢薰?/a>
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12N1/18;C12N1/16;C12N1/14;C12N9/50;C12N9/26;C12N9/24;C05F11/08;C12R1/125;C12R1/685;C12R1/465;C12R1/11;C12R1/10;C12R1/865
• 代理公司: 雙鴨山欣合專利事務所(普通合伙) 23203
• 代理人: 黃志堅

1.一種酶催化復合微生態制劑，包括復合酶制劑和復合微生物菌制劑，其特征是：所述的復合酶制劑與復合微生物菌制劑比例為1：8，所述的復合酶制劑與復合微生態菌制劑混合構成該一種酶催化復合微生態制劑；所述的復合酶制劑由超敏蛋白酶、蛋白酶、木聚糖酶和淀粉酶按照比例1:2:3:2混合構成，所述的復合酶制劑中的超敏蛋白酶、蛋白酶、木聚糖酶和淀粉酶由市場購買所得，所述的復合微生態菌制劑由枯草芽孢桿菌、高溫放線菌、糞腸球菌、酵母菌、黑曲霉菌、阿南德氏鏈霉菌、巨大芽泡桿菌、地衣芽泡桿菌、沼澤紅假單胞菌及釀酒酵母構成，其比例為：3:2:2:1:2:1:3:1:1:2，所述的復合微生態菌制劑制備方法的具體步驟如下 ：

（1）原菌種斜面培養 ：將冷凍保藏管中的枯草芽孢桿菌、高溫放線菌、糞腸球菌、酵母菌、黑曲霉菌、阿南德氏鏈霉菌、巨大芽泡桿菌、地衣芽泡桿菌、沼澤紅假單胞菌及釀酒酵母分別在斜面中活化，之后分別置于 90mm 培養皿中進行純化，得枯草芽孢桿菌種、高溫放線菌種、糞腸球菌種、酵母菌種、黑曲霉菌種、阿南德氏鏈霉菌種、巨大芽泡桿菌種、地衣芽泡桿菌種、沼澤紅假單胞菌種及釀酒酵母菌種備用 ；

（2）原菌種液體培養 ：將枯草芽孢桿菌斜面菌種接種于已滅菌的液體培養基I中，接著于 30℃下好氧培養1-2 天得枯草芽孢桿菌原菌液 ；將高溫放線菌斜面菌種接種于已滅菌的液體培養基II中，之后置于25℃ -27℃下好氧培養 1-2 天得高溫放線菌原菌液 ；將糞腸球菌斜面菌種接種于已滅菌的液體培養基III中，接著于 28℃ -30℃厭氧培養 2-3天得糞腸球菌原菌液 ；將黑曲霉菌斜面菌種接種于已滅菌的液體培養基Ⅴ中，之后于 28℃ -30℃下好氧培養 3 天得黑曲霉菌原菌液 ；將阿南德氏鏈霉菌斜面菌種接種于已滅菌的液體培養基ⅤI中，之后于 28℃ -30℃下好氧培養 3 天得阿南德氏鏈霉菌原菌液 ；將巨大芽泡桿菌斜面菌種接種于已滅菌的液體培養基ⅤII中，之后于 28℃ -30℃下好氧培養 3天得巨大芽泡桿菌原菌液 ；將地衣芽泡桿菌斜面菌種接種于已滅菌的液體培養基ⅤIII中，之后于 28℃ -30℃下好氧培養 3 天得地衣芽泡桿菌原菌液 ；將酵母菌斜面菌種接種于已滅菌的液體培養基IX中，之后置于 28-30℃下好氧培養 3天得酵母菌原菌液 ；將沼澤紅假單胞菌斜面菌種接種于已滅菌的液體培養基X中，接著于 28℃ -30℃厭氧鎢絲燈光照培養 5-7天之后得沼澤紅假單胞菌原菌液 ；

（3）一級種子培養 ：將枯草芽孢桿菌原菌液、高溫放線菌原菌液、糞腸球菌原菌液、酵母菌原菌液、黑曲霉菌原菌液、阿南德氏鏈霉菌原菌液、巨大芽泡桿菌原菌液、地衣芽泡桿菌原菌液、沼澤紅假單胞菌原菌液及釀酒酵母原菌液按3:2:2:1:2:1:3:1:1:2的菌量比接種于已滅菌的發酵培養基Ⅰ中進行培養，具體地 ：先接種將枯草芽孢桿菌原菌液、高溫放線菌原菌液、酵母菌原菌液、黑曲霉菌原菌液、阿南德氏鏈霉菌原菌液、巨大芽泡桿菌原菌液、地衣芽泡桿菌原菌液及釀酒酵母原菌液，并于 30℃下好氧培養 3 天，然后再接種糞腸球菌原菌液與沼澤紅假單胞菌原菌液，于37℃下厭氧培養 3 天，得復合微生物菌劑的一級種子 ；

（4）二級種子培養 ：將所得的一級種子按 5% 的接種量接種于已滅菌的發酵培養基Ⅱ中，并于 30℃下先好氧培養 3-5 天再厭氧培養 3-5 天，得復合微生態菌劑的二級種子 ；

（5）成品培養 ：將所得的二級種子按 5% 的接種量接種至已滅菌的發酵培養基Ⅲ中，并于 30℃下先好氧 3-5 天再厭氧培養 3-5 天，獲得復合微生態菌劑的成品。