[發明專利]一種腸道病毒EV71型病毒樣顆粒、編碼基因、表達載體、重組酵母菌及制備方法和應用

在審

• 申請號: 202110087379.4
• 申請日: 2021-01-22
• 公開（公告）號: CN112724206A
• 公開（公告）日: 2021-04-30
• 發明（設計）人: 蘇彩霞;韓旭東;金貞姬;李邐;江春虎;劉佳璐;王鳳鑫
• 申請（專利權）人: 眾盈生物（青島）有限公司
• 主分類號: C07K14/085
• 分類號: C07K14/085;C12N15/41;C12N15/81;C12N1/19;A61K39/125;A61P31/14;C12R1/78
• 代理公司: 北京高沃律師事務所 11569
• 代理人: 薛紅凡

1.一種腸道病毒EV71型病毒樣顆粒，其特征在于，所述病毒樣顆粒由EV71病毒的P1前體蛋白的四個結構蛋白VP1、VP2、VP3和VP4自組裝獲得，結構蛋白VP1的氨基酸序列如SEQID No.1所示；結構蛋白VP2的氨基酸序列如SEQ ID No.2所示；結構蛋白VP3的氨基酸序列如SEQ ID No.3所示；結構蛋白VP4的氨基酸序列如SEQ ID No.4所示。

2.權利要求1所述病毒樣顆粒的編碼基因，其特征在于，所述編碼基因的核苷酸序列如SEQ ID No.5～8所示；其中，結構蛋白VP1的編碼基因的核苷酸序列如SEQ ID No.5所示；結構蛋白VP2的編碼基因的核苷酸序列如SEQ ID No.6所示；結構蛋白VP3的編碼基因的核苷酸序列如SEQ ID No.7所示；結構蛋白VP4的編碼基因的核苷酸序列如SEQ ID No.8所示。

3.包含權利要求2所述編碼基因的重組表達載體，其特征在于，所述重組表達載體中的編碼基因按照VP4-VP2-VP3-VP1的順序串聯表達。

4.根據權利要求3所述的重組表達載體，其特征在于，所述重組表達載體的骨架載體為漢遜酵母表達載體。

5.一種重組菌，其特征在于，所述重組菌包括權利要求3或4所述的重組表達載體。

6.權利要求1所述病毒樣顆粒、權利要求2所述編碼基因、權利要求3或4所述表達載體或權利要求5所述重組菌在制備腸道病毒EV71型病毒疫苗中的應用。

7.一種腸道病毒EV71型病毒樣顆粒疫苗的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：

(1)分別構建權利要求1所述四個結構蛋白VP4、VP2、VP3和VP1的表達盒元件；

(2)將VP4、VP2、VP3和VP1的表達盒元件依次串聯到表達載體中，得到重組表達載體；

(3)將所述重組表達載體轉化宿主細胞，篩選得到多拷貝轉化子；

(4)利用多拷貝轉化子表達得到腸道病毒EV71型病毒樣顆粒疫苗。

8.根據權利要求7所述的制備方法，其特征在于，步驟(2)所述表達載體為漢遜酵母表達載體；步驟(3)所述宿主細胞為尿嘧啶缺陷型ATCC26012(Ura3-)；步驟(4)所述表達在體積濃度為0.5～1.5％的甲醇溶液誘導下進行。

9.權利要求7或8所述制備方法制備得到的腸道病毒EV71型病毒樣顆粒疫苗。