[發明專利]植物光系統I多克隆抗體及其制備方法

有效

• 申請號: 202110084895.1
• 申請日: 2021-01-22
• 公開（公告）號: CN112409468B
• 公開（公告）日: 2021-04-20
• 發明（設計）人: 趙運明;劉桂山
• 申請（專利權）人: 北京啟維益成科技有限公司
• 主分類號: C07K14/415
• 分類號: C07K14/415;C07K16/16;G01N33/68;G01N33/58
• 代理公司: 北京誠呈知識產權代理事務所(普通合伙) 11883
• 代理人: 楊凌波

本發明公開了一種植物光系統I多克隆抗體及其制備方法。本發明設計光系統I相關蛋白的抗原表位以及合成的相應的KLH偶聯多肽，以該系列偶聯多肽作為免疫原免疫動物獲得相應的抗體，用于ELISA法檢測植物光系統I相關蛋白的檢測試劑，實現了光系統I相關蛋白的全檢測和精確定量檢測，有利于對光系統I的深入研究。

技術領域

本發明屬于檢測用抗體制備技術領域，具體涉及一種植物光系統I多克隆抗體及其制備方法。

背景技術

光系統是進行光吸收的功能單位，是由葉綠素、類胡蘿卜素、脂和蛋白質組成的復合物。包括光系統I（ PSI）和光系統II（PSII），每一個光系統含有兩個主要成分：捕光復合物和光反應中心復合物。這兩個光系統是以串聯的方式協同作用的。PSI的光化學反應是長光波反應，其主要特征是NADP⁺的還原。PSII的光化學反應是短光波反應，其主要特征是水的光解和放氧，奪取水中的電子供給PSI。

PSI由光能吸收、傳遞和轉化所需的一系列蛋白質和結合在這些蛋白上的色素分子及電子傳遞鏈組分組成，涉及的蛋白主要有PsaA蛋白、PsaB蛋白、PsaC蛋白、PsaD蛋白、PsaE蛋白、PsaF蛋白、PsaG蛋白、PsaH蛋白、PsaJ蛋白、PsaK蛋白、PsaL蛋白、PsaN 蛋白、PsaO蛋白、Ptac8/PsaP蛋白，PsaA蛋白和PsaB蛋白結合形成異二聚體的反應中心，PsaC蛋白、PsaD蛋白、PsaE蛋白構成 PSI的外周蛋白，PsaL蛋白、PsaK蛋白、PsaF蛋白、PsaJ蛋白為膜內在蛋白，PsaN 蛋白、PsaO蛋白蛋白的功能目前還未完全研究清楚。在進行光系統I蛋白研究時，常常要需要對提取的光系統蛋白亞基的種類和含量進行測定，傳統的測定方法是采用單一蛋白提取并測定的方法，費時費力，且測定結果不準確，采用抗原抗體進行蛋白檢測的方法是一種較為精確的方法，但是，需要制備相應的標準抗體，目前，針對光系統I蛋白檢測用抗體的報道非常少，常見的為亞基蛋白全蛋白免疫制備的抗體，這些抗體的專一性和靈敏性均不強，交叉反應太多，檢測結果不可靠，且目前還未有針對光系統I全部種類蛋白檢測的抗體，阻礙了對于光系統I的深入研究。

發明內容

本發明的目的在于提供一種植物光系統I多克隆抗體及其制備方法。

一種光系統I抗原表位，所述抗原表位包括來自PsaA蛋白的抗原表位，其氨基酸序列如序列表SEQ ID NO:1所示；來自PsaB蛋白的抗原表位，其氨基酸序列如序列表SEQ IDNO:2所示；來自PsaC蛋白的抗原表位，其氨基酸序列如序列表SEQ ID NO:3所示；來自PsaD蛋白的抗原表位，其氨基酸序列如序列表SEQ ID NO:4所示；來自PsaE蛋白的抗原表位，其氨基酸序列如序列表SEQ ID NO:5所示；來自PsaF蛋白的抗原表位，其氨基酸序列如序列表SEQ ID NO:6所示；來自PsaG蛋白的抗原表位，其氨基酸序列如序列表SEQ ID NO:7所示；來自PsaH蛋白的抗原表位，其氨基酸序列如序列表SEQ ID NO:8所示；來自PsaJ蛋白的抗原表位，其氨基酸序列如序列表SEQ ID NO:9所示；來自PsaK蛋白的抗原表位，其氨基酸序列如序列表SEQ ID NO:10所示；來自PsaL蛋白的抗原表位，其氨基酸序列如序列表SEQ ID NO:11所示；來自PsaN 蛋白的抗原表位，其氨基酸序列如序列表SEQ ID NO:12所示；來自PsaO蛋白的抗原表位，其氨基酸序列如序列表SEQ ID NO:13所示。

優選的，在抗原表位氨基酸序列中不含有半胱氨酸的抗原表位末端加半胱氨酸。加入半胱氨酸的目的為增強KLH蛋白與抗原表位多肽的偶聯性能，增強免疫原性。

一種光系統I多克隆抗體的制備方法，按照如下步驟進行：

（1）抗原的合成：按照所述光系統I抗原表位的氨基酸序列，人工合成抗原多肽，在不含有半胱氨酸的抗原表位末端加半胱氨酸；

（2）將抗原多肽聯到具有強免疫原功能的KLH蛋白上并用PBS稀釋后，得到抗原溶液；