[發(fā)明專利]一種具有免疫調(diào)節(jié)活性的六安瓜片多糖及其制備方法與應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202110081907.5
• 申請日: 2021-01-21
• 公開（公告）號: CN112759663B
• 公開（公告）日: 2022-04-26
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 吳慶喜;吳志;王棟;王曉慧;劉彩霞
• 申請（專利權(quán)）人: 安徽大學(xué)
• 主分類號: C08B37/00
• 分類號: C08B37/00;A61K31/715;A61K36/82;A61P37/02;A61K127/00
• 代理公司: 安徽省合肥新安專利代理有限責(zé)任公司 34101
• 代理人: 盧敏

本發(fā)明公開了一種具有免疫調(diào)節(jié)活性的六安瓜片多糖及其制備方法與應(yīng)用，該多糖的分子量為2.35×10⁵Da。本發(fā)明的六安瓜片多糖能夠調(diào)節(jié)細(xì)胞免疫活性，其對免疫細(xì)胞體外增強的特性使其可作為免疫調(diào)節(jié)劑，廣泛應(yīng)用于保健類食品和藥品領(lǐng)域，具有重要的研究和開發(fā)利用前景。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種具有免疫調(diào)節(jié)活性的六安瓜片多糖及其制備方法與應(yīng)用，屬于食品及醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

免疫是人體重要的生理功能，依靠這種功能機體能識別“自己”和“非己”成分，從而破壞、排斥進入機體的異源性物質(zhì)，或自身產(chǎn)生的損傷及變異細(xì)胞，以維持人體健康。1962年Walford提出免疫衰老學(xué)說，認(rèn)為免疫功能的衰退是造成機體衰老的重要因素，隨著年齡的增長，免疫器官老化、免疫細(xì)胞數(shù)目減少，機體的免疫功能逐漸減弱，感染性疾病、腫瘤發(fā)病率會逐漸增高。免疫功能的下降還會進一步加速機體的衰老。

提高人體免疫功能的藥物在調(diào)節(jié)免疫活性的同時也會帶來眾多副作用，如抗藥性、藥物依賴性、致畸致癌性等。因而，尋找一種天然高效、無毒性的機體免疫調(diào)節(jié)劑是當(dāng)前研究者關(guān)注的熱點研究方向。隨著人們對天然活性物質(zhì)研究的逐漸深入，多糖被越來越多的研究者關(guān)注，近些年來綠茶多糖、紅茶多糖等均被證實具有良好的免疫調(diào)節(jié)功效。

六安瓜片簡稱瓜片、片茶，是中華傳統(tǒng)歷史名茶，也是中國十大名茶之一，其產(chǎn)自安徽省六安市大別山一帶，為綠茶特種茶類。在世界所有茶葉中，六安瓜片是唯一無芽無梗的茶葉，由單片生葉制成。去芽不僅保持單片形體，且無青草味；梗在制作過程中已木質(zhì)化，剔除后，可確保茶味濃而不苦，香而不澀。作為地方特色生物質(zhì)資源，目前該種綠茶多糖的免疫活性尚未有報道，因此具有潛在地研究開發(fā)價值。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明旨在提供一種具有免疫調(diào)節(jié)活性的六安瓜片多糖及其制備方法與應(yīng)用。本發(fā)明發(fā)現(xiàn)的六安瓜片多糖具有良好的免疫調(diào)節(jié)活性，體外免疫活性檢測六安瓜片多糖在25-400μg/mL時對RAW264.7巨噬細(xì)胞均無明顯的細(xì)胞毒性，且能大幅增加RAW264.7巨噬細(xì)胞NO釋放量，激活免疫細(xì)胞活性，具有重要的研究和開發(fā)利用前景。

本發(fā)明為實現(xiàn)發(fā)明目的，采用如下技術(shù)方案：

一種具有免疫調(diào)節(jié)活性的六安瓜片多糖，其分子量為2.35×10⁵Da，紅外光譜顯示其具有顯著的多糖紅外特征吸收峰。

本發(fā)明具有免疫調(diào)節(jié)活性的六安瓜片多糖的制備方法，包括如下步驟：

(1)將六安瓜片茶葉經(jīng)粉碎機粉碎后，過80目篩，得粉料；

(2)將所得粉料在50-80℃無水乙醇中浸泡處理2-4h，紗布過濾、真空干燥，得濾渣；

(3)按料液比1g:10-40mL，將所得濾渣在溫度為50-100℃的熱水中浸提1-5h，重復(fù)2-3次，合并提取液；

(4)將步驟(3)所得提取液濃縮至體積的1/3-1/10，向所得濃縮液中加入乙醇至乙醇最終的體積濃度為75-90％，然后4℃靜置8-12h，5000-8000rpm離心10-30min，收集沉淀；

(5)將步驟(4)所得沉淀用水溶解后，離心去除不溶物，再經(jīng)冷凍干燥，獲得六安瓜片粗多糖；

(6)將步驟(5)所得六安瓜片粗多糖用去離子水配成濃度為20-40mg/mL的粗多糖溶液，離心后經(jīng)0.22μm濾膜過濾，所得截留溶液置于DEAE-cellulose 52離子交換柱中進行純化，流動相為0.3mol/L的氯化鈉溶液、流速為0.5-1.0mL/min；收集產(chǎn)物，再使用截留分子量為3.5kDa-5.5kDa的透析袋進行純化后，冷凍干燥，即得六安瓜片多糖。

作為優(yōu)選，步驟(2)中，所述真空干燥的溫度為60-70℃、時間為2-4h。