[發明專利]一種綿羊細管精液的冷凍保存方法

在審

• 申請號: 202110081363.2
• 申請日: 2021-01-21
• 公開（公告）號: CN112889808A
• 公開（公告）日: 2021-06-04
• 發明（設計）人: 肖廣慶;許丹娜;劉欣偉;楊利峰;李成山;楊瑞瑞;謝希玲
• 申請（專利權）人: 肖廣慶
• 主分類號: A01N1/02
• 分類號: A01N1/02
• 代理公司: 鄭州大通專利商標代理有限公司 41111
• 代理人: 張立強

本發明涉及一種綿羊細管精液的冷凍保存方法，包括以下步驟：步驟A，將采好的鏡檢活力在0.7以上的綿羊精液用羊凍精稀釋液等溫稀釋，用細管灌裝機灌裝后，放入4℃環境中平衡待用；步驟B：將平衡好的綿羊精液細管放入液氮冷凍裝置中，所述細管位于液氮面上方、距離液氮面3.5～5cm或8～9cm范圍內；步驟C：當綿羊精液細管到達﹣10℃時，蓋上液氮冷凍裝置的箱蓋；步驟D：當綿羊精液細管達﹣100℃后,快速降溫至?140℃，結束冷凍，將細管取出迅速放入液氮中保存。本發明能夠獲得綿羊精液較高的復蘇效果，為小規模綿羊凍精生產提供技術支持，為大規模生產提供依據。

技術領域

本發明涉及綿羊精液冷凍領域，具體涉及一種綿羊細管精液的冷凍保存方法。

背景技術

綿羊的凍精制作和牛的凍精制作工藝類似，要經過采精——稀釋液稀釋——4℃低溫平衡——冷凍這一個過程，而后便可放在液氮環境中儲存。稀釋液的好壞，在精液稀釋、平衡時就可以看出。而冷凍需掌握稀釋后精液溫度在下降過程中幾個危險區域及在精液通過幾個危險區域的冷凍速率，冷凍速率與精液所處環境溫度有關，溫差越大，降溫速度越快, 精子冷凍危險溫度為4℃～-60℃，有兩個節點：一是4℃～-10℃的冷凍速率；二是-10℃～ -60℃冷凍速率。由于生產中要裝袋保存，為避免回溫應將細管精液冷凍至-120℃分裝保存到液氮中。

在以往綿羊精液冷凍過程中，主要參考牛冷凍精液的冷凍過程及降溫速率，使用冷凍儀對綿羊精液進行冷凍，但是綿羊精子冷凍效果不穩定，在解凍后鏡檢活力低，有效精子少，不能進行批量生產。

發明內容

本發明為解決綿羊細管精液冷凍效果不好、解凍后精子活力低的問題，提供一種綿羊細管精液的冷凍保存方法，能夠獲得綿羊精液較高的復蘇效果，為小規模綿羊凍精生產提供技術支持，為大規模生產提供依據。

為了實現上述目的，本發明的技術方案是：

一種綿羊細管精液的冷凍保存方法，其特征在于，包括以下步驟：

步驟A：將采好的鏡檢活力在0.7以上的綿羊精液用羊凍精稀釋液等溫稀釋，用細管灌裝機灌裝后，放入4℃環境中平衡待用；

步驟B：將平衡好的綿羊精液細管放入液氮冷凍裝置中，所述細管位于液氮面上方、距離液氮面3.5～5cm或8～9cm范圍內；

步驟C：當綿羊精液細管到達﹣10℃時，蓋上液氮冷凍裝置的箱蓋；

步驟D：當綿羊精液細管達﹣100℃后，快速降溫至-140℃，將細管取出迅速放入液氮中保存。

進一步地，所述步驟A中羊凍精稀釋液是將三羥甲基-氨基甲烷、檸檬酸、檸檬酸鈉、葡萄糖、果糖、EDTA、維生素B、維生素C、氯化鈉與雙蒸水混合均勻后，使用0.2μm濾膜過濾，各組分的濃度范圍為：三羥甲基-氨基甲烷35～38g/L；檸檬酸18～19g/L；檸檬酸鈉5～6g/L；葡萄糖35～45g/L；果糖5～8g/L；EDTA 1～2g/L；維生素C 4～6g/L；維生素B 2～5g/L；氯化鈉3～4g/L；向過濾后的溶液中加入3000-5000單位青鏈霉素，配成羊凍精稀釋液基礎液，取基礎液80毫升，加入甘油5毫升、卵黃15毫升，攪拌均勻即為羊凍精稀釋液。

進一步地，所述步驟A中平衡時間為4h。

進一步地，所述步驟B中細管位置距離液氮面高度為4cm。

進一步地，在步驟C中，所述綿羊細管精液溫度由4℃降溫至-10℃所用時間在1.08～ 1.48min范圍內；在步驟D中，所述綿羊細管精液溫度由-10℃降溫至-100℃所用時間在6.36～12.84min范圍內。

進一步地，在步驟C中，所述綿羊細管精液溫度由4℃降溫至-10℃所用時間為1.28min；在步驟D中，所述綿羊細管精液溫度由-10℃降溫至-100℃所用時間為9.6min。