[發明專利]一種用于診斷椎間盤退行性變的血清miRNA標志物及其應用

在審

• 申請號: 202110080708.2
• 申請日: 2021-01-21
• 公開（公告）號: CN112646877A
• 公開（公告）日: 2021-04-13
• 發明（設計）人: 吳卉喬;胡博;王云浩;臧法智;陳華江;曹鵬;袁文
• 申請（專利權）人: 上海長征醫院
• 主分類號: C12Q1/6883
• 分類號: C12Q1/6883;C12N15/113;C12N15/11
• 代理公司: 上海申浩律師事務所 31280
• 代理人: 趙青

本發明提供了一種椎間盤退行性變的診斷試劑或診斷工具以及miRNA在制備所述診斷試劑或診斷工具中的應用。所述診斷工具包括用于檢測miRNA表達量的所述診斷試劑，所述miRNA選自miRNA?194、miRNA?515、miRNA?138、miRNA?146中的任一種或兩種以上。本發明第一次發現了對椎間盤退行性變具有較高診斷價值的生物標記物miRNA?194、miRNA?515、miRNA?138、miRNA?146；通過miRNA血清標志物診斷試劑及診斷工具的制備，有助于椎間盤退行性變的早期篩查，為臨床早期診斷、提高療效提供堅實的基礎。

技術領域

本發明屬于生物醫學檢測技術領域，具體涉及診斷椎間盤退行性變的miRNA及其應用。

背景技術

椎間盤退行性變癥(intervertbral disc degeneration，IDD)是中老年的常見病、多發病，嚴重威脅人類健康，影響正常生活工作。據統計，全世界80％人口曾罹患腰痛，其中由IDD引起腰痛占絕大多數(Rodrigues-Pinto R,Ward L,Humphreys M,et al.Humannotochordal cell transcriptome unveils potential regulators of cell functionin the developing intervertebral disc.Sci Rep.2018；8(1):12866.)。嚴重IDD患者，甚至引起下肢感覺障礙、大小便失禁等。IDD已成為全球致殘的重要因素，且隨著世界人口老齡化，IDD威脅健康的問題日益嚴重。早期診斷、早期治療有助于抑制IDD進展，緩解疼痛，防止感覺障礙等神經癥狀出現。但是，部分患者早期癥狀不明顯，較難明確診斷；且IDD導致的腰痛也較難與軟組織炎癥導致的腰痛鑒別。因此，尋找椎間盤退行性變的早期篩查、診斷的高靈敏性、特異性的血清標志物尋是目前該領域研究的重要方向，亟待解決。

人類基因組計劃發現，人體內有大量的非編碼序列發揮重要的生物學功能，其中microRNA(miRNA)是非編碼RNA中的重要一員。miRNA為全長僅有20-24bp、高度保守、非編碼的短鏈核苷酸片段，隨著研究的深入，發現其在人體的腫瘤發生、炎癥反應、退行性變等生物學過程中發揮了重要作用。miRNA特異性作用于下游靶點mRNA，進而調控人體重大疾病的發生、發展，故miRNA可作為重大疾病篩查和診斷的重要候選生物學標志物。研究發現，雖然在外周血中，miRNA含量較低，但是其性質穩定，PCR可有有效檢測其含量，且miRNA含量與疾病發生、發展具有顯著的相關性，故通過外周血miRNA制備疾病檢測試劑盒具有有效的可行性。且外周血miRNA疾病檢測試劑盒檢測效率高、速度快、成本相對較低，具有較好的應用前景。因此，發現與椎間盤退行性變有顯著相關性的miRNA，并將其作為miRNA生物標志物，研制相應篩查診斷試劑盒，其在椎間盤退行性變的篩查診斷中將發揮重大的意義。CN105483272A披露了miR-1249可以作為診治椎間盤退行性病變的分子標志物。CN105420376A披露了miR-744可以作為診治椎間盤退行性病變的分子標志物。CN105521490A披露了miRNA-888-3p可以作為診治椎間盤退行性病變的分子標志物。但是，現有技術中披露的與椎間盤退行性變有顯著相關性的miRNA生物標志物的種類較少，因此，發現與椎間盤退行性變有顯著相關性的更多種類的miRNA生物標志物對椎間盤退行性變的篩查診斷將發揮重大意義。

發明內容

為了克服現有技術中披露的與椎間盤退行性變有顯著相關性的miRNA生物標志物的種類較少的技術缺陷，本發明的第一個方面提供一種椎間盤退行性變的診斷試劑或診斷工具，所述診斷工具包括用于檢測miRNA表達量的試劑，所述miRNA選自miRNA-194、miRNA-515、miRNA-138、miRNA-146中的任一種或兩種以上。所述用于檢測miRNA表達量的試劑包括探針和/或PCR引物。