[發明專利]用于肌肉干細胞培養的交聯水凝膠及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 202110080342.9
• 申請日: 2021-01-21
• 公開（公告）號: CN112778544B
• 公開（公告）日: 2021-12-03
• 發明（設計）人: 胡靜;尹健;汪翔
• 申請（專利權）人: 江南大學
• 主分類號: C08J3/075
• 分類號: C08J3/075;C08J3/24;C08L5/04;C08L89/00;C08L5/10;C12N5/0775;A23L13/00
• 代理公司: 哈爾濱市陽光惠遠知識產權代理有限公司 23211
• 代理人: 林娟

1.一種用于肌肉干細胞培養的交聯水凝膠的制備方法，其特征在于，所述方法包括：首先，將膠原蛋白溶解制成溶液，然后加入海藻酸鹽和硫酸乙酰肝素蛋白多糖，將其與膠原蛋白溶液混勻；然后向溶液中加入ε-PL和TG酶，攪拌均勻，將漿料放置在模具中進行交聯，得到水凝膠；具體包括以下步驟：

(1)制備膠原蛋白溶液：將膠原蛋白和醋酸水溶液混勻溶解得到膠原蛋白溶液；

(2)制備膠原蛋白/海藻酸鹽溶液：向步驟(1)中制備的膠原蛋白溶液中加入海藻酸鹽，攪拌至海藻酸鹽溶解，得到膠原蛋白/海藻酸鹽溶液；

(3)制備膠原蛋白/海藻酸鹽/硫酸乙酰肝素蛋白聚糖溶液：向步驟(2)中制備的膠原蛋白/海藻酸鹽溶液加入硫酸乙酰肝素蛋白聚糖多糖，攪拌至溶解，得到膠原蛋白/海藻酸鹽/硫酸乙酰肝素蛋白聚糖溶液；

(4)制備物理交聯的第一漿料：向(3)中制備的膠原蛋白/海藻酸鹽/硫酸乙酰肝素蛋白聚糖溶液加入ε-PL，攪拌均勻，得到物理交聯制備的第一漿料；

(5)制備酶交聯的第二漿料：向(4)中制備的第一漿料加入TG酶，攪拌均勻，得到酶交聯制備的第二漿料；

(6)水凝膠：將(5)中得到的漿料放入模具中，交聯12～36h，脫模，得到用于肌肉干細胞生長的水凝膠。

2.根據權利要求1所述的一種用于肌肉干細胞培養的交聯水凝膠的制備方法，其特征在于，步驟(1)中所述的醋酸水溶液的濃度為0.02～0.05mol/L，膠原蛋白的質量是水質量的10～15％。

3.根據權利要求1或2所述的一種用于肌肉干細胞培養的交聯水凝膠的制備方法，其特征在于，步驟(2)中海藻酸鹽的質量是水質量的15～25％。

4.根據權利要求1或2所述的一種用于肌肉干細胞培養的交聯水凝膠的制備方法，其特征在于，步驟(3)中膠原蛋白/海藻酸鹽/硫酸乙酰肝素蛋白聚糖溶液中硫酸乙酰肝素蛋白聚糖的濃度為200～500μg/L。

5.根據權利要求3所述的一種用于肌肉干細胞培養的交聯水凝膠的制備方法，其特征在于，步驟(3)中膠原蛋白/海藻酸鹽/硫酸乙酰肝素蛋白聚糖溶液中硫酸乙酰肝素蛋白聚糖的濃度為200～500μg/L。

6.根據權利要求1或2所述的一種用于肌肉干細胞培養的交聯水凝膠的制備方法，其特征在于，步驟(4)中海藻酸鹽的羧基和ε-PL的氨基的摩爾比為1:1～1:2；步驟(5)中TG酶的用量為膠原蛋白質量的1～10％。

7.根據權利要求3所述的一種用于肌肉干細胞培養的交聯水凝膠的制備方法，其特征在于，步驟(4)中海藻酸鹽的羧基和ε-PL的氨基的摩爾比為1:1～1:2；步驟(5)中TG酶的用量為膠原蛋白質量的1～10％。

8.根據權利要求1～7任一項所述的一種用于肌肉干細胞培養的交聯水凝膠的制備方法制備得到的用于肌肉干細胞培養的交聯水凝膠。

9.包含權利要求8所述的用于肌肉干細胞培養的交聯水凝膠的培養基。

10.一種肌肉干細胞培養的方法，其特征在于，所述方法以權利要求8所述的用于肌肉干細胞培養的交聯水凝膠作為培養基。

11.權利要求1～7任一項所述的一種用于肌肉干細胞培養的交聯水凝膠的制備方法或權利要求8所述的用于肌肉干細胞培養的交聯水凝膠在培養肉領域的應用。