[發(fā)明專利]一種植物縮合單寧的提取和純化方法及其應(yīng)用

有效

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• 申請日: 2021-01-21
• 公開（公告）號: CN112876671B
• 公開（公告）日: 2022-09-02
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 彭凱;陳冰;莫文艷;黃文
• 申請（專利權(quán)）人: 廣東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院動物科學(xué)研究所
• 主分類號: C08G65/38
• 分類號: C08G65/38;A23K20/121;A23K50/80
• 代理公司: 廣州嘉權(quán)專利商標(biāo)事務(wù)所有限公司 44205
• 代理人: 慶之

本發(fā)明公開了一種植物縮合單寧的提取和純化方法及其應(yīng)用，該提取方法采用復(fù)合酶提取劑對植物樣品進(jìn)行抽提，該復(fù)合酶提取劑中含有漆酶、纖維素酶和果膠酶。本發(fā)明首次提出采用酶解法提取縮合單寧，不使用有機(jī)溶劑，避免了有機(jī)溶劑對環(huán)境造成的污染，而且也有效的規(guī)避了有機(jī)溶劑對植物細(xì)胞的破壞，減少因縮合單寧與植物細(xì)胞破損流出的蛋白質(zhì)或微量元素等物質(zhì)發(fā)生絡(luò)合反應(yīng)而造成的得率損失。本發(fā)明中的提取方法制得的縮合單寧得率、純度均遠(yuǎn)超傳統(tǒng)方法，具有極高的推廣價值。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及植物天然產(chǎn)物領(lǐng)域，具體涉及一種植物縮合單寧的提取和純化方法及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

單寧是一種復(fù)雜多元酚衍生物，是栲膠的主要成分，可使生皮轉(zhuǎn)變?yōu)楦铮杂纸凶鲋参秣焚|(zhì)。單寧廣泛存在于植物的根、莖、葉中，作為一種天然可再生資源，具有品種多、分布廣、數(shù)量大的優(yōu)點(diǎn)，是繼纖維素、木質(zhì)素、半纖維素之后在植物中含量較多的一種物質(zhì)，可與蛋白質(zhì)、生物堿、多糖等反應(yīng)。按照單寧的化學(xué)結(jié)構(gòu)特征，將其分為水解類單寧和縮合類單寧兩大類，縮合類單寧一般為黃烷醇類化合物的衍生物，分子骨架為C₆·C₃·C₆。根據(jù)相對分子質(zhì)量的大小，縮合類單寧又可分為黃烷醇單體和聚合體。習(xí)慣上將相對分子質(zhì)量在500道爾頓(Da)以上的聚合體稱為縮合類單寧。

相關(guān)技術(shù)中，僅公開了對于水解類單寧的提取方法，一般為采用丙酮、乙醚等有機(jī)溶劑萃取法，該方法適用于水解類單寧這種低分子量或水溶性好的單寧，對于大分子量的縮合單寧(分子量介于1000-20000Da)的提取效果差，傳統(tǒng)的有機(jī)溶劑萃取法難以將大分子量的縮合單寧從植物細(xì)胞中有效浸提出來。此外，在有機(jī)溶劑的作用下，細(xì)胞結(jié)構(gòu)容易發(fā)生破壞，由于縮合單寧與蛋白質(zhì)等大分子的絡(luò)合作用，會導(dǎo)致進(jìn)一步阻礙提取過程。

因此，亟待開發(fā)出一種操作簡便、成本低的高效提取植物縮合單寧的提取和純化方法，以獲得優(yōu)質(zhì)的植物縮合單寧，以便于縮合單寧的進(jìn)一步開發(fā)和利用。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明旨在至少解決上述現(xiàn)有技術(shù)中存在的技術(shù)問題之一。為此，本發(fā)明提出一種縮合單寧的提取方法，能夠在不使用有機(jī)溶劑的條件下，提取植物中的大分子量的縮合單寧，而且還能有效的保護(hù)植物細(xì)胞的完整性，減少因縮合單寧與植物細(xì)胞破損流出的蛋白質(zhì)或微量元素等物質(zhì)發(fā)生絡(luò)合反應(yīng)而造成的得率損失。

本發(fā)明的第一個方面，提供一種縮合單寧的提取方法，包括如下步驟：

(1)取植物樣品，加入復(fù)合酶提取劑提取，得到粗提物；

(2)取步驟(1)得到的粗提物，加入甲醇溶液溶解，過濾除雜，交聯(lián)葡聚糖凝膠柱過柱，洗脫得到洗脫液，所述洗脫液即為純化后的縮合單寧。

根據(jù)本發(fā)明的一種具體實(shí)施方式，至少具有以下有益效果：

1.本發(fā)明首次提出采用酶解法制備縮合單寧，并探索得到了最佳的復(fù)合酶組合及各組分酶的占比含量，提取率遠(yuǎn)超傳統(tǒng)的有機(jī)提取法。

2.本發(fā)明中的縮合單寧提取方法，不使用有機(jī)溶劑，避免了有機(jī)溶劑對環(huán)境造成的污染，而且也有效的規(guī)避了有機(jī)溶劑對植物細(xì)胞的破壞，減少因縮合單寧與植物細(xì)胞破損流出的蛋白質(zhì)或微量元素等物質(zhì)發(fā)生絡(luò)合反應(yīng)而造成的得率損失。

3.本發(fā)明中的縮合單寧提取方法提取得到的縮合單寧得率大于3.0％，純度大于85.85％。提取得到的縮合單寧聚合度為17～20，縮合單寧中原花青定單寧與原翠雀定單寧的質(zhì)量比為3.3～4.2，延伸單元表兒茶素含量為62.3％～68.8％，延伸單元表沒食子兒茶素含量為23.5％～28.0％，各項(xiàng)數(shù)據(jù)均優(yōu)于傳統(tǒng)化學(xué)有機(jī)溶劑提取工藝。

根據(jù)本發(fā)明的第一個方面，在一些實(shí)施方式中，上述步驟(1)中復(fù)合酶提取劑中含有漆酶、纖維素酶和果膠酶。

在一些優(yōu)選實(shí)施方式中，上述復(fù)合酶提取劑為漆酶、纖維素酶和果膠酶。