[發(fā)明專利]一種用于制備奧利司他中間體的生物酶及其應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202110078799.6
• 申請日: 2021-01-20
• 公開（公告）號: CN114854704B
• 公開（公告）日: 2023-10-10
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 季俊虬;張美;王猛
• 申請（專利權(quán)）人: 合肥大禹制藥有限公司
• 主分類號: C12N9/04
• 分類號: C12N9/04;C12P7/62
• 代理公司: 上海光華專利事務(wù)所(普通合伙) 31219
• 代理人: 馬德舉

1.一種用于制備奧利司他中間體的生物酶，所述奧利司他中間體為(R)-β-羥基十四烷酸酯，其結(jié)構(gòu)式如I所示，所述生物酶作用的底物為β-羰基十四烷酸酯，其結(jié)構(gòu)式如II所示；其特征在于，所述生物酶為短鏈醇脫氫酶，所述短鏈醇脫氫酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.1和/或與SEQ ID NO.1同源性大于90％的序列所示；

和/或，所述短鏈醇脫氫酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.2和/或與SEQ ID NO.2同源性大于90％的序列所示；

和/或，所述短鏈醇脫氫酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.3和/或與SEQ ID NO.3同源性大于90％的序列所示；

其中，R＝CH₃和/或C₂H₅。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的生物酶，其特征在于：所述短鏈醇脫氫酶的氨基酸序列如SEQID NO.1和/或與SEQ ID NO.1同源性為99.5％、99％、98％、97％、96％、95％、94％、93％、92％的序列所示；和/或，所述短鏈醇脫氫酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.2和/或與SEQ IDNO.2同源性為99.5％、99％、98％、97％、96％、95％、94％、93％、92％的序列所示；和/或，所述短鏈醇脫氫酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.3和/或與SEQ ID NO.3同源性為99.5％、99％、98％、97％、96％、95％、94％、93％、92％的序列所示。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的生物酶，其特征在于：所述生物酶為酶蛋白、酶粉、酶液、固定化酶或固定化細菌。

4.含有權(quán)利要求1-3任一項所述的生物酶的反應(yīng)體系，其特征在于：所述反應(yīng)體系還包括：底物、輔酶，所述底物為β-羰基十四烷酸酯，其結(jié)構(gòu)式如II所示；所述輔酶為還原型輔酶I NADH或還原型輔酶II NADPH，和/或，所述輔酶為氧化型NAD+或NADP+，和/或，所述輔酶為能產(chǎn)生NADPH和/或NADH的酶。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的反應(yīng)體系，其特征在于：所述反應(yīng)體系還包括葡萄糖脫氫酶和葡萄糖，或者，所述反應(yīng)體系還包括醇；

和/或，所述反應(yīng)體系的PH值在6-8之間；

和/或，所述反應(yīng)體系還包括用于增加底物溶解性的助溶劑；

和/或，所述反應(yīng)體系中，所述輔酶的濃度為0.1-0.5g/L。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的用于制備奧利司他中間體的生物酶及其應(yīng)用，其特征在于：所述葡萄糖脫氫酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示；

和/或，所述反應(yīng)體系中，所述底物與葡萄糖脫氫酶的摩爾比為1∶1.1-2；

和/或，所述反應(yīng)體系的PH值在7.0-7.5之間；

和/或，采用碳酸氫鈉水溶液或氫氧化鈉水溶液作為所述反應(yīng)體系的PH調(diào)節(jié)劑；

和/或，所述緩沖液為PBS或Tris-HCl；

和/或，所述醇選自甲醇、乙醇、丙醇、丁醇、辛醇、戊醇、己醇、庚醇、乙二醇、丙三醇、異丙醇、丙二醇中的至少一種。

和/或，所述助溶劑選自二甲基亞砜、乙醇、丙酮、正己烷、環(huán)己烷、甲苯、乙酸乙酯、叔丁醇、異丙醇中的至少一種。

7.如權(quán)利要求1-3任一項所述的生物酶和/或如權(quán)利要求4-6任一項所述的反應(yīng)體系在制備奧利司他中間體上的應(yīng)用。

8.一種采用如權(quán)利要求4-6任一項所述的反應(yīng)體系制備奧利司他中間體的方法，其特征在于，所述方法包括如下步驟：將所述反應(yīng)體系混合均勻后進行攪拌反應(yīng)，反應(yīng)結(jié)束后，將反應(yīng)體系中的酶滅活，然后經(jīng)萃取、合并有機相、濃縮得到所述奧利司他中間體。