[發明專利]一種抗糖基轉移酶A亞單位的納米抗體及其應用

有效

• 申請號: 202110077974.X
• 申請日: 2021-01-20
• 公開（公告）號: CN112812189B
• 公開（公告）日: 2022-05-17
• 發明（設計）人: 郭剛;劉宇;劉開云;舒月力;李彥;王寧
• 申請（專利權）人: 四川大學華西醫院
• 主分類號: C07K16/40
• 分類號: C07K16/40;C07K16/12;C12N15/13;A61K39/40;A61P31/04;G01N33/68;G01N33/569
• 代理公司: 成都科海專利事務有限責任公司 51202
• 代理人: 劉雙蘭

本發明公開了一種抗糖基轉移酶A亞單位的納米抗體及其應用，該納米抗體可變區具有3個互補決定區CDR?1、CDR?2、CDR?3，CDR?1由SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列組成，CDR?2由SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列組成，CDR?3由SEQ ID NO.3所示的氨基酸序列組成。本發明提供的抗糖基轉移酶A亞單位的納米抗體具有與糖基轉移酶A亞單位特異性結合的活性，并中和糖基轉移酶A的活性，可以用于檢測艱難梭菌，也可用用于制備治療抗艱難梭菌的藥物；該納米抗體還具有分子量小、親和力高、結構和性能穩定等特點；能夠耐受胃部酸性環境，不易被胃蛋白酶降解等優勢。

技術領域

本發明屬于抗體技術領域，涉及納米抗體技術，具體而言，涉及一種抗糖基轉移酶A（TcdA）亞單位的納米抗體及其應用。

背景技術

艱難梭菌(Clostridium difficile，CD)廣泛分布于自然環境中，可存活于水，土壤，蔬菜，狗、貓體內及醫院環境中，是動物和人腸道中的正常菌群。不規范使用抗生素，使腸道菌群失調，耐藥的CD就會大量生長繁殖，導致抗生素相關性腹瀉和偽膜性腸炎等疾病，是抗生素相關性腹瀉病的主要病原體。CD的芽胞抵抗力強，難消除，可在醫院環境長期存在，使CD成為了醫院內獲得性腹瀉的主要病原菌之一。

CD相關疾病的感染與發病主要是產毒型CD在腸道過度增殖并大量釋放毒素引起的。正常情況下，腸道中的CD受到雙歧桿菌、擬桿菌、優桿菌等優勢菌群的抑制，處于劣勢，不致病；當長期大量接受廣譜抗菌藥物、免疫抑制劑或化療藥物治療后，腸道微生態平衡被打破，腸道菌群失調，CD過度繁殖并釋放毒素，引發艱難梭菌感染(Clostridiμm difficileinfection，CDI)相關疾病。

當CD大量繁殖時，其通過菌體或孢子的表面蛋白破壞結腸正常菌群，然后再定殖，在鞭毛和蛋白酶的協助下，進入黏液層，黏附于腸上皮細胞，釋放相關毒素，破壞腸細胞、改變細胞骨架、釋放粘液和炎癥產物，引起腸道感染性疾病。感染后可能出現高熱、血水樣便、腹脹、中毒性巨結腸等表現。CD能產生6種毒素，主要致病因子為毒素A、毒素B及二元毒素。而其中的毒素A為腸毒素，可與腸黏膜刷狀緣細胞上毒素受體結合，趨化白細胞，激活巨噬細胞、肥大細胞及中性粒細胞，釋放強效的炎癥遞質和細胞因子，從而引起局部黏膜血管的通透性增加，絨毛損害，黏膜出血、壞死；在偽膜性腸炎中，毒素A和B最直接的作用是破壞上皮屏障的緊密聯接，促進炎癥因子的釋放、中性粒細胞的移動和偽膜的形成。由于艱難梭菌毒素A和毒素B的C端都具有一個毒素識別和結合細胞受體的功能區，稱為受體結合區（receptor-binding domain，RBD），如果能夠研發出針對這一區域的抗體，使RBD被覆蓋，就能夠直接阻斷毒素的結合，使其無法發揮毒素效果，從而達到免疫防御的作用。

由于CD的感染率和感染程度越來越嚴重，開發新的防治方法就尤為重要了。而鑒于A毒素即糖基轉移酶A在CD感染中具有重要的作用，開發能夠針對糖基轉移酶A的特異性抗體，同樣能夠在抵抗CDI中發揮主要作用。目前，還沒有針對糖基轉移酶A RBD的特異性抗體的相關報道。

發明內容

針對目前缺少艱難梭菌有效治療藥物的技術現狀，本發明目的旨在提供一種抗糖基轉移酶A亞單位（TcdA）的納米抗體，該納米抗體具有與糖基轉移酶A亞單位的RBD特異性結合的活性，可以用于檢測艱難梭菌與抑制艱難梭菌的活性，具有良好的臨床應用前景。

本發明提供的抗糖基轉移酶A亞單位的納米抗體，其可變區具有3個互補決定區CDR-1、CDR-2、CDR-3，CDR-1由SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列組成，CDR-2由SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列組成，CDR-3由SEQ ID NO.3所示的氨基酸序列組成。