[發(fā)明專利]一種多功能微環(huán)境保護(hù)外泌體水凝膠及其制備方法和應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202110077305.2
• 申請(qǐng)日: 2021-01-20
• 公開（公告）號(hào): CN112870228B
• 公開（公告）日: 2023-01-24
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 崔文國(guó);林嘉盈;王臻;俞小華
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 杭州賢石生物科技有限公司
• 主分類號(hào): C12N5/0775
• 分類號(hào): C12N5/0775;A61K35/28;A61K9/06;A61K47/20;A61K47/02;A61P15/00;A61P15/08
• 代理公司: 成都帝鵬知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 51265
• 代理人: 李華

本發(fā)明提供了一種多功能微環(huán)境保護(hù)外泌體水凝膠及其制備方法與應(yīng)用。其制備方法包括以下步驟：(1)獲得脂肪來(lái)源的間充質(zhì)干細(xì)胞，進(jìn)行消化后獲取原代細(xì)胞進(jìn)行繼代培養(yǎng)，取繼代培養(yǎng)后的脂肪干細(xì)胞備用；(2)取脂肪來(lái)源的間充質(zhì)干細(xì)胞，置于含10％胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基中培養(yǎng)，采用超速離心法提取間充質(zhì)干細(xì)胞釋放的外泌體；(3)取巰基?聚乙二醇溶解于脂肪干細(xì)胞外泌體中，然后將AgNO₃水溶液經(jīng)稀釋后與其混合，形成透明的多功能微環(huán)境保護(hù)外泌體水凝膠。本發(fā)明的多功能微環(huán)境保護(hù)外泌體水凝膠與現(xiàn)有報(bào)道相比表現(xiàn)出更佳的修復(fù)效果，能夠促進(jìn)新生血管形成和子宮內(nèi)膜組織再生，更好的幫助恢復(fù)生育能力，提高妊娠和出生率。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于薄型子宮內(nèi)膜修復(fù)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種多功能微環(huán)境保護(hù)外泌體水凝膠及其制備方法和應(yīng)用。

背景技術(shù)

成功妊娠需要優(yōu)質(zhì)的胚胎、容受性良好的子宮內(nèi)膜以及二者同步、協(xié)調(diào)的相互作用。子宮內(nèi)膜的厚度對(duì)子宮內(nèi)膜容受性有一定的影響，并影響胚胎的成功著床。由于雌激素水平低、感染、炎癥、妊娠期宮腔操作史(如藥流后清宮、人工流產(chǎn)、產(chǎn)后清宮)及宮腔粘連等，子宮內(nèi)膜受到損傷、厚度變薄，降低了子宮內(nèi)膜容受性，從而導(dǎo)致胚胎著床失敗或妊娠后早期流產(chǎn)，嚴(yán)重影響女性的生育能力。薄型子宮內(nèi)膜癥狀已導(dǎo)致長(zhǎng)期不育和負(fù)面的家庭結(jié)局。

關(guān)于薄型子宮內(nèi)膜治療的報(bào)道很多，但目前仍無(wú)一種特效方法。阿司匹林被認(rèn)為可增加子宮及卵巢血流灌注，從而提高胚胎種植率及臨床妊娠率而被廣泛應(yīng)用于臨床，然而其療效仍存在爭(zhēng)議，近年來(lái)亦有研究發(fā)現(xiàn)阿司匹林并不能提高臨床妊娠率、活產(chǎn)率、及減少流產(chǎn)率等，且患者孕期服用阿司匹林有引起出血等不良反應(yīng)。近年來(lái)研究還發(fā)現(xiàn)枸櫞酸西地那非片能降低子宮內(nèi)膜血流阻力，使子宮內(nèi)膜血管計(jì)數(shù)增加，從而改善子宮內(nèi)膜血流灌注，促進(jìn)子宮內(nèi)膜生長(zhǎng)，有利于胚胎著床，提高臨床妊娠率，然而臨床應(yīng)用枸櫞酸西地那非片可出現(xiàn)頭痛、面色潮紅、消化不良、鼻塞和視覺功能異常等不良反應(yīng)，且尚無(wú)臨床證據(jù)證明其是否對(duì)胎兒造成不利影響，而且使用枸櫞酸西地那非片的患者仍有一部分療效不滿意。雖然目前的激素治療能夠改善一些婦女的生育效果，但由于復(fù)雜的子宮內(nèi)膜微環(huán)境的損害和感染，這些反應(yīng)仍然不令人滿意。因此探索一種效果可靠、副作用小的改善薄型子宮內(nèi)膜的治療方法是近年臨床應(yīng)用中較為迫切的需求。

已有研究表明，間充質(zhì)干細(xì)胞具有強(qiáng)大增殖及多向分化能力、免疫調(diào)節(jié)、促進(jìn)血管新生等潛能。由于骨髓源性干細(xì)胞(BMSCs)和脂肪源性干細(xì)胞(ADSCs)具有分化為子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞和基質(zhì)細(xì)胞的能力，已被研究作為再生子宮內(nèi)膜的方法。干細(xì)胞療法在再生醫(yī)學(xué)和內(nèi)膜修復(fù)領(lǐng)域有很大的應(yīng)用前景，然而多項(xiàng)臨床前瞻性研究發(fā)現(xiàn)干細(xì)胞移植遠(yuǎn)期臨床效果欠佳。其中脂肪干細(xì)胞移植效率低下、存活率低等問題是制約臨床干細(xì)胞移植應(yīng)用的瓶頸。另外研究發(fā)現(xiàn)干細(xì)胞移植可能存在微血管栓塞、體內(nèi)成瘤等安全問題亦限制其臨床應(yīng)用。目前干細(xì)胞治療受到以下限制：對(duì)表型穩(wěn)定細(xì)胞的持續(xù)來(lái)源的要求，對(duì)受管細(xì)胞的免疫介導(dǎo)排斥的風(fēng)險(xiǎn)，這些過(guò)程的高成本和技術(shù)困難，以及癌癥或異位組織發(fā)育的潛在風(fēng)險(xiǎn)。

近來(lái)脂肪干細(xì)胞分泌的膜性微囊泡外泌體引起了學(xué)者們的廣泛關(guān)注和重視，成為干細(xì)胞研究領(lǐng)域的熱點(diǎn)。脂肪干細(xì)胞外泌體可以模擬間充質(zhì)干細(xì)胞生物學(xué)功能，發(fā)揮其促進(jìn)血管新生、改善缺血組織的血流灌注、組織修復(fù)、免疫調(diào)節(jié)等作用。而且外泌體不具備細(xì)胞核結(jié)構(gòu)，在宿主體內(nèi)不能擴(kuò)增，無(wú)異倍體性風(fēng)險(xiǎn)，脂肪干細(xì)胞外泌體能夠穿過(guò)質(zhì)膜，并且發(fā)生免疫排斥的可能性更小，在臨床應(yīng)用過(guò)程中具有較好的安全性，且不會(huì)像脂肪干細(xì)胞那樣容易堵塞微血管，突破了脂肪干細(xì)胞治療存在的較多問題，具有更廣闊的臨床應(yīng)用前景。