[發(fā)明專利]一種具有促生活性的芽孢桿菌屬細(xì)菌及其制備方法和應(yīng)用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202110070354.3
• 申請日: 2021-01-19
• 公開（公告）號: CN112608874A
• 公開（公告）日: 2021-04-06
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 秦波;柳皓月;金輝;楊曉燕;程濟南;許欣欣;閔燈
• 申請（專利權(quán)）人: 中國科學(xué)院蘭州化學(xué)物理研究所
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;A01N63/22;A01P21/00;C05F11/08;C05G3/80;C12R1/07
• 代理公司: 蘭州中科華西專利代理有限公司 62002
• 代理人: 曹向東

本發(fā)明涉及一種具有促生活性的芽孢桿菌屬細(xì)菌，該菌株為短小芽孢桿菌（Bacillus pabuli）B05，其保藏編號為CGMCC No.21387。同時，本發(fā)明還公開了該菌株的制備方法和應(yīng)用。本發(fā)明從植物根部分離出菌株，并將菌株的代謝物作用于牧草，用于改良草原土壤生物化學(xué)肥力狀況，提高草原土壤生態(tài)系統(tǒng)功能穩(wěn)定性，恢復(fù)和提高草原生產(chǎn)力，增加產(chǎn)量、提高品質(zhì)從而促進畜牧業(yè)的發(fā)展。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及微生物技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種具有促生活性的芽孢桿菌屬細(xì)菌及其制備方法和應(yīng)用。

背景技術(shù)

植物根際促生細(xì)菌(Plant growth-promoting rhizobacteria，PGPR) 可以在一定程度上增強植物對干旱、鹽堿和高溫等非生物因素脅迫的耐受性，還可以通過固氮、溶磷、解鉀及降低乙烯水平等方式對植物生長發(fā)育進行調(diào)節(jié)。近些年來，基于PGPR在農(nóng)業(yè)、環(huán)境保護等領(lǐng)域的重要價值, 已成為國內(nèi)外學(xué)者研究的熱點?，F(xiàn)已發(fā)現(xiàn)假單胞菌（Pseudomonas）、芽胞桿菌（Bacillus）、類芽胞桿菌（Paenibacillus）、土壤桿菌（Agrobacterium）、黃桿菌(Flavobacterium)等20多個種屬的根際生物具有防病促生的潛能。其中，芽孢桿菌由于產(chǎn)生芽孢，抗逆性強，是目前研究最深入、最廣泛的促生細(xì)菌之一。

近年來研究表明，由于過量施用化肥而導(dǎo)致草原土壤酸化、營養(yǎng)失衡、生物多樣性減少、生產(chǎn)力降低、草地退化等嚴(yán)重威脅到草原生態(tài)系統(tǒng)功能。在此背景下，通過接種PGPR可用來改良草原土壤生物化學(xué)肥力狀況，提高草原土壤生態(tài)系統(tǒng)功能穩(wěn)定性，恢復(fù)和提高草原生產(chǎn)力，增加產(chǎn)量、提高品質(zhì)從而促進畜牧業(yè)的發(fā)展。因此，微生物菌劑成為新的研究熱點，通過選育具有抗病和促生特性的內(nèi)生菌及根際微生物，用于提高牧草的生長和抗病能力，從而治理退化的草場。

目前，開發(fā)利用安全有效的生物源促生劑越來越受到廣泛的關(guān)注，而微生物的次級代謝產(chǎn)物成為研究和開發(fā)新的促生產(chǎn)品的重要來源之一。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種具有促生活性的芽孢桿菌屬細(xì)菌。

本發(fā)明所要解決的另一個技術(shù)問題是提供該芽孢桿菌屬細(xì)菌的制備方法。

本發(fā)明所要解決的第三個技術(shù)問題是提供該芽孢桿菌屬細(xì)菌的應(yīng)用。

為解決上述問題，本發(fā)明所述的一種具有促生活性的芽孢桿菌屬細(xì)菌，其特征在于：該菌株為短小芽孢桿菌（Bacillus pabuli）B05。該菌株B05已于2020年12月17日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏中心地址是：北京市朝陽區(qū)大屯路，中國科學(xué)院微生物研究所，郵編是100101，保藏編號為CGMCC No.21387。

如上所述的一種具有促生活性的芽孢桿菌屬細(xì)菌的制備方法，其特征在于：選取健康紫花針茅帶根植株，將紫花針茅新鮮的根部切成長度為0.2~0.5厘米的小段，經(jīng)消毒后用滅菌蒸餾水沖洗三次，并置于無菌濾紙上吸干水分；然后放置于TSA平板培養(yǎng)基上，28±2℃避光培養(yǎng)；待平板上長出肉眼可見的細(xì)菌菌落后，用無菌牙簽挑取少許菌落轉(zhuǎn)移至新的TSA平板培養(yǎng)基上進行純化，沒有污染，則轉(zhuǎn)入TSA斜面培養(yǎng)基劃線在4℃下短期保存或轉(zhuǎn)入TSA液體培養(yǎng)基和甘油的混合液中在-70℃下保存長期保存即得。

所述消毒是指對切段的紫花針茅新鮮的根部先經(jīng)體積濃度為75%的乙醇表面消毒30 s，再經(jīng)質(zhì)量濃度為3%的次氯酸鈉表面消毒5 min。

所述TSA平板培養(yǎng)基是指在1000mL水中加入胰蛋白胨15g、大豆蛋白胨 5g、氯化鈉5g、瓊脂18g，混合均勻后調(diào)pH值至7.1~7.5，經(jīng)121℃滅菌20min制得。