[發明專利]一種表達載體及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 202110067392.3
• 申請日: 2021-01-19
• 公開（公告）號: CN112877353B
• 公開（公告）日: 2023-01-17
• 發明（設計）人: 李萌;李淑娟
• 申請（專利權）人: 東北林業大學
• 主分類號: C12N15/82
• 分類號: C12N15/82;C12N15/64
• 代理公司: 北京高沃律師事務所 11569
• 代理人: 呂紀濤

本發明屬于生物技術領域，特別是涉及一種表達載體及其制備方法和應用。本發明提供了一種表達載體，所述表達載體包括SP6啟動子和HALO標簽，所述表達載體能夠在體外表達蛋白，具有拷貝數高，便于提取用于誘導蛋白的質粒，蛋白表達速度快，耗時短的特點。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，特別是涉及一種表達載體及其制備方法和應用。

背景技術

市面上常見的商業化蛋白表達載體大部分應用于原核生物中，比如應用于大腸桿菌中。

在使用表達載體時，需要考慮宿主菌的選擇是否適應外源蛋白的表達，某些特殊的啟動子需要特殊的宿主菌才能發揮功能。另一方面，在選擇宿主菌的時候需要選用蛋白酶相關基因缺失的菌株作為宿主來減少產物降解，提高產率。同時，為了提高產量，還需要控制各項表達條件，包括培養液成分、溫度、誘導與培養時間的長短等。

綜上，體內誘導蛋白需要考慮多種多樣的因素的影響，在使用時極難控制各種條件的影響，提高目標蛋白的產量。因此，對于現有技術來說，提供一種能脫離宿主菌體而在體外表達的表達載體是非常迫切的。

發明內容

為了解決上述問題，本發明提供了一種表達載體及其制備方法和應用。本發明提供的表達載體能夠穩定地在體外表達蛋白。

為了實現上述目的，本發明提供了如下技術方案：

本發明提供了一種表達載體，所述表達載體包括SP6啟動子和HALO標簽。

優選的，所述表達載體的骨架載體包括T載體。

優選的，所述SP6啟動子的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示；所述HALO標簽的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示。

優選的，所述表達載體的核苷酸序列如SEQ ID NO:4所示。

本發明還提供了上述表達載體的制備方法，包括以下步驟：

將SP6啟動子和HALO標簽連接到骨架載體上，得到表達載體。

優選的，所述的制備方法，包括以下步驟：

(1)利用SP6啟動子的引物進行擴增得到SP6啟動子；

(2)將SP6啟動子與T載體連接后得到連接有啟動子的載體；

(3)利用HALO標簽的引物進行擴增得到HALO標簽；

(4)將連接有啟動子的載體進行線性化處理，得到線性化載體；

(5)將HALO標簽與線性化載體連接得到表達載體。

優選的，所述SP6啟動子的引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6所示。

優選的，所述HALO標簽的引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:8所示。

優選的，所述線性化處理用引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:9和SEQ ID NO:10所示。

本發明還提供了上述表達載體或上述制備方法制備得到的表達載體在體外表達蛋白中的應用。

本發明提供了一種表達載體，所述表達載體包括SP6啟動子和HALO標簽。由實施例可知，本發明提供的表達載體能夠在體外表達蛋白，具有拷貝數高，便于提取用于誘導蛋白的質粒，蛋白表達速度快，耗時短的特點。

附圖說明

圖1為HALO標簽擴增序列堿基序列及氨基酸序列；

圖2為HALO標簽蛋白三級結構預測；

圖3為最終獲得的載體圖譜；