[發(fā)明專利]檢測(cè)可用于指導(dǎo)卡馬西平用藥的HLA-B*1502分型的引物和方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202110067046.5
• 申請(qǐng)日: 2021-01-19
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN112626204B
• 公開(kāi)（公告）日: 2022-11-18
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 陳雪青;王淑一
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 福州艾迪康醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室有限公司
• 主分類號(hào): C12Q1/6883
• 分類號(hào): C12Q1/6883;C12Q1/6869;C12N15/11
• 代理公司: 浙江杭州金通專利事務(wù)所有限公司 33100
• 代理人: 黃素萍

1.一對(duì)檢測(cè)指導(dǎo)卡馬西平用藥的HLA-B*1502分型的引物，其特征在于，包括：

特異性擴(kuò)增HLA-B*1502分型的引物，其堿基序列為：

HLA-B*1502-F：TGTAAAACGACGGCCAGTGAACACACAGATCTCCAAGACCA

HLA-B*1502-R：AACAGCTATGACCATGCAGCCATACATCCTCTGGATGA。

2.如權(quán)利要求1所述的引物，其特征在于，還包括測(cè)序引物，其堿基序列為：

M13 F：TGTAAAACGACGGCCAGT

M13 R：AACAGCTATGACCATG。

3.如權(quán)利要求1所述的引物，其特征在于，還包括檢測(cè)內(nèi)參基因的引物actin-F和actin-R，所述檢測(cè)內(nèi)參基因的堿基序列為：

actin-F：CTAACTGCGCGTGCGTTCT

actin-R：AGTCCTTAGGCCGCCAGGGG。

4.如權(quán)利要求1所述的引物，其特征在于，所述正、反向引物在體系內(nèi)的濃度均為0.1875uM。

5.如權(quán)利要求3所述的引物，其特征在于，所述內(nèi)參基因的引物的使用濃度比為：actin-F:actin-R＝1:1。

6.一種檢測(cè)指導(dǎo)卡馬西平用藥的HLA B1502分型的方法，包括以下步驟：

(1)抽提外周血或骨髓中的基因組DNA；

(2)利用擴(kuò)增引物HLA-B*1502-F/HLA-B*1502-R和actin-F/actin-R對(duì)(1)中的DNA進(jìn)行擴(kuò)增，當(dāng)內(nèi)參actin-F/actin-R擴(kuò)增有目的條帶，而HLA-B*1502-F/HLA-B*1502-R擴(kuò)增無(wú)目的條帶時(shí)，可確定樣本HLA-B*1502分型為陰性，當(dāng)兩對(duì)引物的擴(kuò)增都有目的條帶時(shí)，需對(duì)樣本進(jìn)行測(cè)序檢測(cè)；

(3)利用測(cè)序引物M13-F與M13-R對(duì)(2)中的擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行測(cè)序；

(4)將(3)中的測(cè)序結(jié)果與野生型HLA-B*1502等位基因序列進(jìn)行比較，與HLA-B*1502等位基因序列完全相符，則可確定樣本HLA-B*1502分型陽(yáng)性，否則為陰性；

其中PCR擴(kuò)增引物為：

HLA-B*1502-F：TGTAAAACGACGGCCAGTGAACACACAGATCTCCAAGACCA

HLA-B*1502-R：AACAGCTATGACCATGCAGCCATACATCCTCTGGATGA。

7.如權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于，擴(kuò)增體系內(nèi)模板DNA濃度最低為0.25ng/uL。

8.如權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于，測(cè)序引物堿基序列為：

M13 F：TGTAAAACGACGGCCAGT

M13 R：AACAGCTATGACCATG。