[發明專利]用于構建雙基因聯合敲除的動脈粥樣硬化豬核移植供體細胞的CRISPR系統及其應用

有效

• 申請號: 202110065732.9
• 申請日: 2021-01-19
• 公開（公告）號: CN113046388B
• 公開（公告）日: 2023-04-25
• 發明（設計）人: 牛冬;汪滔;馬翔;劉璐;曾為俊;王磊;程銳;趙澤英;陶裴裴;黃彩云
• 申請（專利權）人: 南京啟真基因工程有限公司
• 主分類號: C12N15/85
• 分類號: C12N15/85;C12N15/12;C12N5/10;C12N15/877;A01K67/027
• 代理公司: 南京天華專利代理有限責任公司 32218
• 代理人: 傅婷婷;徐冬濤

1.一種用于豬APOE和LDLR基因編輯的CRISPR/Cas9系統，其特征在于，包含Cas9表達載體、針對豬APOE基因的gRNA表達載體以及針對豬LDLR基因的gRNA表達載體；所述的Cas9表達載體為質粒全序列如SEQ?ID?NO.2所示的pU6gRNA-eEF1a-mNLS-hSpCas9-EGFP-PURO載體；針對豬APOE基因的gRNA表達載體表達SEQ?ID?NO.23所示的gRNA，其靶點如SEQ?IDNO.19所示；針對豬LDLR基因的gRNA表達載體表達SEQ?ID?NO.42所示的gRNA，其靶點如SEQID?NO.38所示；所述的針對豬APOE基因的gRNA表達載體由SEQ?ID?NO.28和SEQ?ID?NO.29所示的單鏈DNA退火而成的雙鏈插入載體骨架pKG-U6gRNA所得；所述的針對豬LDLR基因的gRNA表達載體由SEQ?ID?NO.46和SEQ?ID?NO.47所示的單鏈DNA退火而成的雙鏈插入載體骨架pKG-U6gRNA所得；所述的載體骨架pKG-U6gRNA的全序列如SEQ?ID?NO.3所示。

2.權利要求1所述的CRISPR/Cas9系統在構建APOE和LDLR基因突變的豬重組細胞中的應用。

3.一種豬APOE和LDLR基因敲除的豬重組細胞，其特征在于由權利要求1所述的CRISPR/Cas9系統共轉染豬原代成纖維細胞經驗證后所得。

4.權利要求3所述的豬重組細胞在構建APOE和LDLR雙基因敲除的克隆豬中的應用。