[發明專利]一種蕨菜中原蕨苷的分離純化制備方法

有效

• 申請號: 202110064639.6
• 申請日: 2021-01-18
• 公開（公告）號: CN112661799B
• 公開（公告）日: 2023-09-22
• 發明（設計）人: 陳乃東;陳乃富;郝經文;朱安玲;徐惠敏;劉孝全;李強;楊維瀚
• 申請（專利權）人: 皖西學院
• 主分類號: C07H15/24
• 分類號: C07H15/24;C07H1/08
• 代理公司: 合肥金安專利事務所(普通合伙企業) 34114
• 代理人: 金惠貞

本發明公開了一種蕨菜中原蕨苷的分離純化制備方法，屬于醫藥生物技術領域。操作步驟如下：(1)將新鮮蕨菜，?50℃以下冷凍干燥，粉碎，獲得凍干粉；(2)將凍干粉進行正丁醇冷凝回流提取2遍，合并濾液，減壓回收正丁醇得浸膏，冷凍干燥，獲得正丁醇提取物；(3)將正丁醇提取物正向硅膠柱層析分離，使用氯仿?甲醇梯度洗脫，減壓濃縮，獲得原蕨苷粗品；(4)將原蕨苷粗品進行C18反向柱純化精制，30％甲醇除雜，45％甲醇洗脫，低溫冷凍干燥除去溶劑，獲得純度大于98％的原蕨苷。本發明原蕨苷的提取率可達65％，為藥物開發提供了可能；本發明具有分離樣品量大、目標物質損失少、提取率高、裝置簡單、操作簡便、適合工業化生產的優點。

技術領域

本發明屬于醫藥生物技術領域，具體涉及蕨菜中原蕨苷的分離純化制備方法。

背景技術

蕨(學名:Pteridium?aquilinum(L.)Kuhn?var.latiusculum(Desv.)Underw.exHeller)是蕨科蕨屬歐洲蕨的一個變種，植株高可達1米。根狀莖長而橫走，密被銹黃色柔毛，以后逐漸脫落；葉遠生，柄長20-80厘米，基部粗3-6毫米，褐棕色或棕禾稈色；葉片闊三角形或長圓三角形，長30-60厘米，寬20-45厘米，先端漸尖，基部圓楔形，三回羽狀。蕨資源豐富，廣布于中國及世界各地。

蕨菜來源于蕨(Pteridium?aquilinum(L.)Kuhn)的幼苗、嫩芽，別名拳頭菜、如意菜、龍爪菜等，據《本草綱目》記載：蕨味甘寒，具有清熱，滑腸，降氣，驅風，化痰等功效。蕨菜因其生長在林間、山野、松林內，少受污染，加之富含多種對人體有益的營養成分，為深受人們喜愛的山珍野菜，長期被人們食用，有“山菜之王”之美譽。

19世紀時，人們注意到過量食用蕨菜能造成牛的中毒甚至死亡，1960年，Rosenberger和Heeschen等人通過對牛的蕨菜中毒癥狀研究中發現蕨菜可能存在致癌作用,1965年，Evans和Mason通過對小鼠喂養蕨菜的實驗中，發現小鼠出現了多種腸道癌變現象，表明蕨菜中可能含有某種致癌成分。1983年-1984年，日本科學家Niwa和荷蘭科學家Hoeven從蕨菜中分離出來了一種可使實驗動物致癌的物質——原蕨苷(Ptaquiloside，簡稱PTA，CAS：87625-62-5，圖1.)，綜合已有文獻報道表明，在蕨及蕨菜中，原蕨苷的含量在0.0μg/g-12945μg/g，平均含量約為0.64％。

藥理活性追蹤研究顯示，原蕨苷可誘發實驗動物的尿道和胃腸道病變出現腫瘤，據此，原蕨苷被世界癌癥組織評級為3類致癌物。研究制備原蕨苷的制備方法，獲得高純度原蕨苷，對蕨菜及其產品的安全性評價和質量控制具有重要意義。

Shahin等人研究發現原蕨苷有相關的免疫調節作用，在長期使用原蕨苷的活性物質蕨菜二烯酮能夠使單核細胞增多，可以增加腫瘤壞死因子的數目，Latorre等人研究發現同時使用硒進行同時處理或者事后處理時，原蕨苷的這種致癌作用便可以逆轉，將硒與原蕨苷進行結合使用，會對癌癥有治療作用。最新的研究顯示，原蕨苷等含1-茚酮結構的蕨素倍半萜類物質，具有抗炎、抗風濕、抗阿爾茨海默病/老年癡呆癥、抗病毒等生物活性，在藥物驗研究領域有著廣闊的應用前景。蕨及蕨菜資源在我國乃至全世界極為豐富，建立一種從蕨菜中快速制備高純度原蕨苷的方法，對新藥研發和蕨資源的深度開發具有重要意義。

原蕨苷在有機試劑中較為穩定，但在水溶液中不穩定，在熱水、酸性及堿性溶劑中極不穩定，極易發生脫糖和芳香化，生成蕨素B(Pterosin?B，CAS:34175-96-7，圖1)。