[發(fā)明專利]一種診斷用生物標(biāo)志物的應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202110064427.8
• 申請日: 2021-01-18
• 公開（公告）號: CN112662752B
• 公開（公告）日: 2022-08-23
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 李向東;張珊珊
• 申請（專利權(quán)）人: 中國農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號: C12Q1/6883
• 分類號: C12Q1/6883;C12N15/113
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本發(fā)明提供一種多囊卵巢綜合征診斷用miRNA生物標(biāo)志物，所述miRNA生物標(biāo)志物為miR?615?5p。本發(fā)明檢測PCOS病人和健康對照的壁層顆粒細胞、卵丘顆粒細胞和血清中miR?615?5p的表達，發(fā)現(xiàn)miR?615?5p水平顯著降低。在人原代顆粒細胞和人卵巢顆粒細胞系KGN中過表達miR?615?5p促進顆粒細胞增殖和雌激素的產(chǎn)生。采用DHT(雙氫睪酮)誘導(dǎo)小鼠多囊卵巢綜合征小鼠模型，發(fā)現(xiàn)miR?615?5p在多囊卵巢綜合征模型小鼠卵巢中低表達。本研究表明，miR?615?5p可以作為多囊卵巢綜合征的生物標(biāo)志物，為臨床制藥提供理論基礎(chǔ)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及分子生物學(xué)和疾病基因研究和診斷領(lǐng)域。具體的，本發(fā)明涉及多囊卵巢綜合征(PCOS)的microRNA生物標(biāo)記物，以及所述microRNA在制備用于診斷或檢測多囊卵巢綜合征的試劑盒或基因芯片的應(yīng)用。

背景技術(shù)

多囊卵巢綜合征(Polycystic ovary syndrome,PCOS)影響6-8％的生殖年齡婦女，是最常見的內(nèi)分泌疾病之一。該疾病最常見的臨床表現(xiàn)是女性出現(xiàn)高雄激素血癥，導(dǎo)致月經(jīng)紊亂、稀少、閉經(jīng)或不規(guī)則陰道出血、不孕、肥胖、多毛、子宮內(nèi)膜過度增生及惡性變化、以及雙側(cè)或單側(cè)卵巢呈多囊性改變并多伴有肥胖表型；在糖脂內(nèi)分泌代謝方面出現(xiàn)胰島素抵抗，繼而引發(fā)糖尿病等并發(fā)癥，遠期并發(fā)癥還包括心血管疾病和子宮內(nèi)膜癌等。PCOS的臨床表現(xiàn)存在異質(zhì)性，在基礎(chǔ)研究方面該病的相關(guān)機制研究一直是熱點和難點。因此，進一步了解PCOS病理生理學(xué)的分子機制可能有助于鑒定新的診斷和治療靶點。

miRNA是內(nèi)源性長度約為21-25nt的非編碼小RNA，對靶基因mRNA的降解和抑制起重要調(diào)控作用。miRNA作為潛在的組織特異性疾病的生物標(biāo)志物，可為許多病理診斷提供有效措施。miRNA的異常表達與一些代謝紊亂(包括肥胖，糖尿病和PCOS等)有關(guān)，并且?guī)醉椦芯客怀霭l(fā)現(xiàn)了miRNAs維持代謝體內(nèi)平衡的功能。因此，miRNA是代謝過程的潛在調(diào)節(jié)因子，并且是調(diào)節(jié)PCOS和相關(guān)疾病相關(guān)復(fù)雜途徑的有希望的靶標(biāo)。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明提供了表明多囊卵巢綜合征(PCOS)的miRNA生物標(biāo)記物。本發(fā)明提供了通過在樣品，特別是顆粒細胞樣品中檢測所述生物標(biāo)記物的miRNA的表達水平變化來檢測或診斷PCOS的方法以及用于這些方法的試劑盒或基因芯片。

本發(fā)明提供的多囊卵巢綜合征診斷用miRNA生物標(biāo)志物，所述miRNA生物標(biāo)志物為miR-615-5p。其成熟序列為：GGGGGUCCCCGGUGCUCGGAUC。

本發(fā)明還提供miR-615-5p在制備或篩選人多囊卵巢綜合征的診斷及治療藥物中的應(yīng)用。

本發(fā)明還提供miR-615-5p在制備人多囊卵巢綜合征檢測試劑中的應(yīng)用。所述檢測試劑選自用于southern印跡法、northern印跡法、PCR法、逆轉(zhuǎn)錄酶PCR法、實時定量PCR法、納米陣列法、宏陣列法、放射自顯影法或原位雜交法等方法檢測生物標(biāo)志物miR-615-5p的相關(guān)試劑。

本發(fā)明進一步提供一種多囊卵巢綜合征診斷用試劑盒，所述試劑盒包括一種或多種特異性檢測miR-615-5p表達水平的引物和/或探針。

所述引物是基于實時定量PCR法檢測miR-615-5p而設(shè)計的，所述引物序列如下：

miR-615-5p-RT:5’-GTCGTATCCAGTGCAGGGTCCGAGGTGCACTGGATACGACCATCCGA-3’

miR-615-5p-F:5’-TGCACGGGGGTCCCCGGTGCTCG-3’

miR-615-5p-R:5’-CTCAACTGGTGTCGTGGAGTC-3’