[發明專利]一種通過幼胚挽救技術獲得茉莉花種間雜交后代的方法

在審

• 申請號: 202110064386.2
• 申請日: 2021-01-18
• 公開（公告）號: CN112470920A
• 公開（公告）日: 2021-03-12
• 發明（設計）人: 黃世琴
• 申請（專利權）人: 黃世琴
• 主分類號: A01H1/02
• 分類號: A01H1/02;A01H4/00
• 代理公司: 長沙新裕知識產權代理有限公司 43210
• 代理人: 劉加

1.一種通過幼胚挽救技術獲得茉莉花種間雜交后代的方法，其特征在于，包括以下步驟：

（1）人工雜交授粉：挑選生長健壯、無病蟲害、花器官發育正常的毛茉莉和菊花茉莉植株作為雜交母本和父本材料，取母本植株上花蕾己長大、次日可開放的花朵進行去雄、套袋，待柱頭發育成熟后，在父本植株上采集當天開放花朵的成熟花粉進行人工授粉；

（2）幼胚消毒與預處理：在授粉35~40d后采集蒴果，先經自來水充分沖洗，在超凈工作臺上先后用70%酒精和l%次氯酸鈉溶液消毒30s和25min，每次消毒后均用無菌水沖洗3~5次；在解剖鏡下剝取幼胚，放入無菌的培養皿中加少量的無菌水進行高溫預處理；

（3）幼胚挽救培養：將預處理后的幼胚接種到萌發培養基中，在25±2℃條件下先暗培養1周，再轉入光照條件繼續培養，直至幼胚萌發生長成幼苗；

（4）增殖擴繁培養：待幼苗生長健壯后，剪下頂芽和莖段，轉入增殖培養基中培養進行擴繁，每3~4周繼代培養一次；

（5）生根培養：選擇2cm以上、具有完整葉片的無根苗接種到生根培養基中，在溫度25±2℃、光照強度2500~3500lx、光照周期14~16h/d的條件下培養誘導生根；

（6）煉苗移栽：當試管苗長至3~4cm高，根長1~2cm時，打開瓶口在培養室內放置3~4d進行煉苗，然后取出試管苗洗去根部的培養基，移栽到基質（珍珠巖：泥炭土=1∶1）中，澆足水，蓋上塑料薄膜，溫度控制在20~25℃，濕度控制在80%以上。

2.根據權利要求1所述的一種通過幼胚挽救技術獲得茉莉花種間雜交后代的方法，其特征在于，步驟（1）中所述人工授粉的具體操作為：用干凈的毛筆刷小心蘸取花粉，涂抹在母本已去雄花朵的柱頭上，授粉后繼續套袋隔離，重復授粉3次。

3.根據權利要求1所述的一種通過幼胚挽救技術獲得茉莉花種間雜交后代的方法，其特征在于，步驟（1）中所述高溫預處理是指將幼胚在37℃條件下處理2d。

4.根據權利要求1所述的一種通過幼胚挽救技術獲得茉莉花種間雜交后代的方法，其特征在于，步驟（2）中所述萌發培養基的組成為：K₂SO₄ 1100~1300mg/L，NH₄NO₃ 500~700mg/L，MgSO₄·7H₂O 350~390mg/L，KH₂PO₄ 165~205mg/L，CaCl₂·2H₂O 450~500mg/L，Na₂-EDTA37~38mg/L，FeSO₄·7H₂O 27.4~28.2mg/L，H₃BO₃ 3.0~3.4mg/L，KI 0.8~1.2mg/L，MnSO₄·4H₂O 7.8~8.4mg/L，ZnSO₄·7H₂O 2.7~3.3mg/L，Na₂MoO₄·2H₂O 0.2~0.3mg/L，CuSO₄·5H₂O0.02~0.03mg/L，CoCl₂·6H₂O 0.04~0.06mg/L，肌醇60~100mg/L，鹽酸吡哆醇0.4~0.6mg/L，鹽酸硫胺素0.9~1.1mg/L，泛酸鈣1.0~2.0mg/L，甘氨酸2.0~3.0mg/L，脯氨酸25~35mg/L，水解酪蛋白100~180mg/L，葉酸1.0-1.5mg/L，苯丙氨酸1.5-2.5mg/L，阿拉伯葡聚糖150-250mg/L，KT 0.8-1.2mg/L，NAA 0.4-0.6mg/L，三十烷醇0.03-0.05mg/L，丁二酸4.0-6.0mg/L，柚皮苷1.8-2.2mg/L，β-巰基乙醇19-23mg/L，活性炭0.5-1.0g/L，蔗糖30-40g/L，瓊脂6.5-7.5g/L，pH值5.5~6.0。