[發明專利]乙型肝炎病毒突變位點T176C在制備預測肝癌復發的試劑盒中的應用

有效

• 申請號: 202110061041.1
• 申請日: 2021-01-18
• 公開（公告）號: CN112626277B
• 公開（公告）日: 2022-09-02
• 發明（設計）人: 蒲蕊;殷建華;陳曦;吳婷;張宏偉;曹廣文
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍海軍軍醫大學
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/6886;C12Q1/6858;C12N15/11
• 代理公司: 上海申浩律師事務所 31280
• 代理人: 趙青

本發明涉及醫學生物檢測技術領域，具體是乙型肝炎病毒突變位點T176C在制備預測肝癌復發的試劑盒中的應用。本發明還提供一種預測肝癌復發的試劑盒。本發明優點在于：本發明發現在乙型肝炎病毒特定的區域某些特定位點的突變與乙型肝炎病毒陽性肝病，尤其是肝細胞癌的復發具有重要聯系。檢測乙肝感染者的T176C關鍵位點突變，并聯合臨床甲胎蛋白水平，能夠提前發現肝癌的復發，并對患者進行早期干預治療和及時的隨訪復查。

技術領域

本發明涉及醫學生物檢測技術領域，具體地說，是乙型肝炎病毒突變位點(T176C)在制備預測肝癌復發的試劑盒中的應用。

背景技術

原發性肝癌是世界上第六大常見的惡性腫瘤，全球每年約有84萬新發肝癌病例，其中約78萬例死亡。確診時，70％以上患者已經失去了外科手術的機會。肝癌預后極差，雖然肝癌手術切除技術層次不斷提高，但由于術后復發率較高的原因，患者的生存時間和生活質量仍舊受到很大的限制。研究表明，接受肝移植術的肝癌患者，其5年內的復發率約為25％，而單純性肝切除患者術后復發率更是高達70％因此，術前有效預判肝癌術后復發，對患者治療方案的調整或預后的判斷有著重要的參考價值。。

目前認為：腫瘤大小、血管浸潤、肝功能和術前營養狀態等因素均與肝癌術后復發有關，但是臨床上還沒有一種很有效的手段能對肝癌的術后復發轉移進行比較準確的預測，腫瘤標志物、腹部CT、腹部MRI等傳統檢查仍是監測術后復發轉移的主要手段，但這些檢查結果的滯后性使其不能對術后復發轉移進行及時的預測。彩色多普勒超聲，它可以無創性的評估肝臟血流情況，重復性較高，但是該方法很大程度上取決于檢查者的經驗，故限制了其在肝癌診斷和隨訪觀察中的應用。多層螺旋CT(MSCT)掃描速度快、層面薄，提高了小病灶的檢出率，同時可清楚顯示肝癌的血供情況，但費用較昂貴。微血管侵犯在肝癌術后復發的危險因素中扮演著重要角色，微血管侵犯陽性的肝癌患者，其術后復發率高出陰性者4.4倍之多。現臨床對肝癌患者微血管侵犯的診斷主要依靠活檢或術后病理學穿刺檢查，因其屬于有創性操作，在實際應用中受到一定范圍的限制。血清學檢查因其快速、簡便、費用低、無痛苦等優勢而成為大規模篩查的主要工具，現臨床診斷肝癌主要依靠AFP(400ng/ml)，AFP是肝臟在胎兒發育過程中產生的一種主要血漿蛋白，在原發性肝癌患者中可升高，AFP水平升高與腫瘤復發和預后不良有關。在實際診斷中，患者瘤體體積＜3cm³時，患者體內AFP含量會出現明顯減低，導致假陰性結果。有部分肝硬化患者體內AFP水平會呈現持續升高狀態，但是并沒有肝癌跡象；而約有20％的晚期肝癌患者，AFP不高反而降低，因此AFP單一檢驗結果，并不能完全作為診斷肝癌的標準。尋找準確、方便的檢查方法發現肝癌切除術后復發是臨床亟需解決的問題，我們迫切需要找到一種新的高敏感度和特異度的診斷標志。

全世界有約超過30億人感染乙型肝炎病毒，乙型肝炎病毒突變是肝硬化和肝細胞癌的重要危險因素之一，隨著感染的持續，病毒的突變率逐漸增加。目前常用的突變檢測方法為基因直接測序，但該方法費時、費力，達不到快速診斷的目的。因而，需要一種準確的檢測的方法用于及早發現肝癌復發和實驗室快速檢測。

Taq-man探針熒光定量PCR技術具有特異性強、靈敏度高、快速且成本低等優點，其特點是針對靶基因的突變部位設定探針，利用探針與模板的特異性結合，然后通過顯色進行結果觀察，簡便實用，特異性高，靈敏度強。整個檢測使用RT-PCR儀即可完成，操作方法更簡單，結果準確性高。

發明內容

本發明的目的在于提供乙型肝炎病毒突變位點(T176C)在制備預測肝癌復發的試劑盒中的應用，并提供了一種預測肝癌復發的試劑盒。

本發明的第一方面，提供乙型肝炎病毒突變位點T176C作為預測和診斷肝癌復發標志物的應用。

本發明的第二方面，提供乙型肝炎病毒突變位點T176C在制備預測肝癌復發的試劑或試劑盒中的應用。

進一步的，所述的試劑或試劑盒為檢測乙肝感染者的乙肝病毒PreS區T176C突變的試劑或試劑盒。