[發(fā)明專利]乙型肝炎病毒突變位點G40C在制備預(yù)測肝癌復(fù)發(fā)的試劑盒中的應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202110061030.3
• 申請日: 2021-01-18
• 公開（公告）號: CN112626276B
• 公開（公告）日: 2022-09-02
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 陳曦;殷建華;蒲蕊;丁一波;張宏偉;曹廣文
• 申請（專利權(quán)）人: 中國人民解放軍海軍軍醫(yī)大學(xué)
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/6851;G01N33/574;C12R1/93
• 代理公司: 上海申浩律師事務(wù)所 31280
• 代理人: 趙青

本發(fā)明涉及醫(yī)學(xué)生物檢測技術(shù)領(lǐng)域，具體是乙型肝炎病毒突變位點G40C在制備預(yù)測肝癌復(fù)發(fā)的試劑盒中的應(yīng)用。本發(fā)明還提供一種預(yù)測肝癌復(fù)發(fā)的試劑盒。本發(fā)明優(yōu)點在于：本發(fā)明發(fā)現(xiàn)在乙型肝炎病毒特定的區(qū)域某些特定位點的突變與乙型肝炎病毒陽性肝病，尤其是肝細胞癌的復(fù)發(fā)具有重要聯(lián)系。檢測乙肝感染者的G40C關(guān)鍵位點突變，并聯(lián)合臨床甲胎蛋白水平，能夠提前預(yù)測肝癌的復(fù)發(fā)，并對患者進行早期干預(yù)治療和及時的隨訪復(fù)查。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及醫(yī)學(xué)生物檢測技術(shù)領(lǐng)域，具體地說，是乙型肝炎病毒突變位點(G40C)在制備預(yù)測肝癌復(fù)發(fā)的試劑盒中的應(yīng)用。

背景技術(shù)

原發(fā)性肝癌是世界上第六大常見的惡性腫瘤，全球每年約有84萬新發(fā)肝癌病例，其中約78萬例死亡。確診時，70％以上患者已經(jīng)失去了外科手術(shù)的機會。肝癌預(yù)后極差，目前肝癌治療手段主要有手術(shù)切除、肝移植及介入治療，術(shù)后高復(fù)發(fā)率特別是早期的復(fù)發(fā)嚴重影響治療效果，肝癌根治性手術(shù)術(shù)后在6、12、24個月時的復(fù)發(fā)率分別為27.0％，39.7％和45.6％，乙肝相關(guān)肝癌的中位生存時間約為16個月，五年生存率介于15％-26％之間。因此，如何提前發(fā)現(xiàn)肝癌復(fù)發(fā)并對其進行長期監(jiān)測具有重要的意義。

目前認為：腫瘤大小、血管浸潤、肝功能等因素均為肝癌術(shù)后復(fù)發(fā)的重要危險因素，但是沒有任何一種有效的方法對患者的預(yù)后進行準確評估。尋找準確、方便的檢查方法提早發(fā)現(xiàn)肝癌術(shù)后復(fù)發(fā)是臨床亟需解決的問題。目前較常用的方法是彩色多普勒超聲，它可以無創(chuàng)性的評估肝臟血流情況，重復(fù)性較高，但是該方法很大程度上取決于檢查者的經(jīng)驗，故限制了其在肝癌診斷和隨訪觀察中的應(yīng)用。多層螺旋CT(MSCT)掃描速度快、層面薄，提高了小病灶的檢出率，同時可清楚顯示肝癌的血供情況，但費用較昂貴。血管造影對小肝癌檢出率高，但其有創(chuàng)性及高費用限制了篩查價值。血清學(xué)檢查因其快速、簡便、費用低、無痛苦等優(yōu)勢而成為大規(guī)模篩查的主要工具，現(xiàn)臨床診斷肝癌主要依靠AFP(400ng/ml)，HCC患者血清AFP水平升高被認為是腫瘤分化程度較低的標志。在實際診斷中，患者瘤體體積＜3cm³時，患者體內(nèi)AFP含量會出現(xiàn)明顯減低，導(dǎo)致假陰性結(jié)果。有部分肝硬化患者體內(nèi)AFP水平會呈現(xiàn)持續(xù)升高狀態(tài)，但是并沒有肝癌跡象；而約有20％的晚期肝癌患者，AFP不高反而降低，因此AFP單一檢驗結(jié)果，并不能完全作為診斷肝癌的標準。所以，我們迫切需要找到一種新的高敏感度和特異度的診斷標志。

乙型肝炎病毒(hepatitis B virus，HBV)屬嗜肝病毒科(hepadnaviridae)中正類嗜肝病毒屬(orthohepadnavirus)，由不完全的環(huán)狀雙鏈DNA組成，根據(jù)基因差異率超過8％，可將乙型肝炎病毒分為A-H八個基因型。目前常用的突變檢測方法為基因直接測序，但該方法費時、費力，達不到快速診斷的目的。因而，需要一種準確的檢測的方法用于識別肝癌復(fù)發(fā)和實驗室快速檢測。

Taq-man探針熒光定量PCR技術(shù)具有特異性強、靈敏度高、快速且成本低等優(yōu)點，其特點是針對靶基因的突變部位設(shè)定探針，利用探針與模板的特異性結(jié)合，然后通過顯色進行結(jié)果觀察，簡便實用，特異性高，靈敏度強。整個檢測使用RT-PCR儀即可完成，操作方法更簡單，結(jié)果準確性高。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供乙型肝炎病毒突變位點(G40C)在制備預(yù)測肝癌復(fù)發(fā)的試劑盒中的應(yīng)用，并提供了一種預(yù)測肝癌復(fù)發(fā)的試劑盒。

本發(fā)明的第一方面，提供乙型肝炎病毒突變位點G40C作為預(yù)測和診斷肝癌復(fù)發(fā)的標志物的應(yīng)用。

本發(fā)明的第二方面，提供乙型肝炎病毒突變位點G40C在制備預(yù)測肝癌復(fù)發(fā)的試劑或試劑盒中的應(yīng)用。

進一步的，所述的試劑或試劑盒為檢測乙肝感染者的乙肝病毒PreS區(qū)G40C突變的試劑或試劑盒。