[發明專利]變形桿菌中金黃色葡萄球菌的分純方法

在審

• 申請號: 202110059359.6
• 申請日: 2021-01-15
• 公開（公告）號: CN112779185A
• 公開（公告）日: 2021-05-11
• 發明（設計）人: 孫楊;葉梅毅;方夢瑩
• 申請（專利權）人: 孫楊
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12N1/02;C12R1/445
• 代理公司: 成都弘毅天承知識產權代理有限公司 51230
• 代理人: 張串串

本發明公開了變形桿菌中金黃色葡萄球菌的分純方法，屬于微生物分離純化技術，具體涉及金黃色葡萄球菌分離純化技術，以解決無法從變形桿菌中分純金黃色葡萄球菌的缺陷，包括如下步驟：取生理鹽水；向生理鹽水中放入氨曲南藥敏紙片，混勻得氨曲南藥物液體；用棉簽蘸取氨曲南藥物液體；均勻涂抹在血瓊脂平板，再靜置5?10分鐘，得含有氨曲南藥物的血瓊脂平板；挑取變形桿菌和金黃色葡萄球菌的混合物，接種；培養箱中孵育16?24小時，即分離出金黃色葡萄球菌。只要混合物中有金黃色葡萄球菌，就能準確分離出大量單個純菌落，并且不被變形桿菌污染，可以直接用于藥物敏感試驗，大大縮短時間周期。

技術領域

變形桿菌中金黃色葡萄球菌的分純方法，本發明屬于微生物分離純化技術領域，具體涉及金黃色葡萄球菌分離純化技術領域。

背景技術

金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)也稱“金葡菌”，隸屬于葡萄球菌屬，為一種常見的食源性致病微生物，金黃色葡萄球菌無芽胞、鞭毛，大多數無莢膜，革蘭氏染色陽性，金黃色葡萄球菌營養要求不高，在普通培養基上生長良好，需氧或兼性厭氧，最適生長溫度37℃，最適生長pH 7.4，平板上菌落厚、有光澤、圓形凸起，直徑1-2mm，血平板菌落周圍形成透明的溶血環，金黃色葡萄球菌有高度的耐鹽性，可在10-15％NaCl肉湯中生長，可分解葡萄糖、麥芽糖、乳糖、蔗糖，產酸不產氣，甲基紅反應陽性，VP反應弱陽性，許多菌株可分解精氨酸，水解尿素，還原硝酸鹽，液化明膠，金黃色葡萄球菌具有較強的抵抗力，對磺胺類藥物敏感性低，但對青霉素、紅霉素等高度敏感。

變形桿菌為能活潑運動而又極為多形性的一群腸道菌，有球形和絲狀形，具有鞭毛、無莢膜、無芽胞、革蘭氏陰性，運動活潑，在固體培養基上呈擴散生長，形成遷徙生長現象，若在培養基中加入0.1％石炭酸或0.4％硼酸可以抑制其擴散生長，形成一般的單個菌落，在SS平板上可以形成圓形、扁薄、半透明的菌落，易與其他腸道致病菌混淆，在血瓊脂平板上有溶血現象。

因變形桿菌遷徙生長的特性，隨著其的生長，菌落會覆蓋整個培養基，讓生長在其中的金黃色葡萄球菌無法分純用于藥物敏感試驗，病人提供過來的臨床標本中，金黃色葡萄球菌是致病菌，但會被變形桿菌污染，目前很好的的分純方法。

發明內容

本發明的目的在于：變形桿菌中金黃色葡萄球菌的分純方法，以解決現有的由于變形桿菌的前夕生長特性，無法從變形桿菌中分純金黃色葡萄球菌的缺陷。

本發明采用的技術方案如下：

變形桿菌中金黃色葡萄球菌的分純方法，包括如下步驟：

步驟1、取2ml濃度為0.45-0.9％的生理鹽水；

步驟2、向生理鹽水中放入1片或1片以上的氨曲南藥敏紙片(大小6mm，氨曲南含量30微升)，氨曲南藥敏紙片用鑷子夾取，混勻得氨曲南藥物液體；

步驟3、用棉簽蘸取氨曲南藥物液體；

步驟4、均勻涂抹在血瓊脂平板，再靜置5-10分鐘，得含有氨曲南藥物的血瓊脂平板；

步驟5、挑取變形桿菌和金黃色葡萄球菌的混合物，接種于含有氨曲南藥物的血瓊脂平板，再3區或4區劃線；

步驟6、培養箱(用于細菌培養的常規的培養箱)中孵育16-24小時，即分離出金黃色葡萄球菌。