[發明專利]抗水稻育性發育蛋白OsP31多克隆抗體及其制備方法和應用

在審

• 申請號: 202110059298.3
• 申請日: 2021-01-15
• 公開（公告）號: CN112876549A
• 公開（公告）日: 2021-06-01
• 發明（設計）人: 紀劍輝;周穎君;高清松;劉廷武;羅玉明;李正鵬
• 申請（專利權）人: 淮陰師范學院
• 主分類號: C07K14/415
• 分類號: C07K14/415;C12N15/29;C12N15/70;C12N1/21;C07K16/16;C07K16/06;G01N33/68;C12R1/19
• 代理公司: 南京申云知識產權代理事務所(普通合伙) 32274
• 代理人: 邱興天

本發明提供了抗水稻育性發育蛋白OsP31多克隆抗體及其制備方法和應用，屬于分子生物技術領域及免疫學領域。本發明包括：(1)分析預測水稻OsP31蛋白抗原性，選擇多肽蛋白序列作為免疫抗原；(2)構建含有抗原的表達載體；(3)利用所述表達載體轉化大腸桿菌；(4)表達并純化所述多肽；(4)使用所述多肽或含有所述多肽的組合物免疫哺乳動物；(5)從所述哺乳動物血清中純化抗體，即得抗水稻育性發育蛋白OsP31抗體。本發明所提供特異性抗體，能夠通過免疫熒光染色技術特異性識別水稻中育性發育蛋白OsP31，能夠檢測及區分水稻減數分裂、雄配子發育等過程中的相關突變體，親和力強、特異性好，具備工業化生產的可能性。

技術領域

本發明屬于分子生物技術領域及免疫學領域，更具體地說，涉及抗水稻育性發育蛋白OsP31多克隆抗體及其制備方法和應用。

背景技術

減數分裂是所有有性生殖生物中一種高度保守細胞分裂過程。減數分裂整個過程包括一次DNA復制和連續兩次細胞核的分裂，細胞學上可以定義為減數分裂I和II。在減數分裂前期I，同源染色體配對、聯會和重組，隨后在后期I發生分離，在末期I的時候兩個姐妹染色單體被拉向兩極。同源重組對于遺傳多樣性的保持是必不可少的，同時也是同源染色體正常分離的先決條件。

聯會復合體是減數分裂前期I的標志性結構，其正確形成及解離是同源染色體配對、聯會、重組及分離等的必要保障。從結構上分析，聯會復合體為一拉鏈樣結構。拉鏈的軸形成于減數分裂細線期，聯會后成為聯會復合體拉鏈的兩條平行骨架，因此染色體軸也通常被稱為聯會復合體側向元件，其蛋白通常被稱為側向元件蛋白。聯會復合體的裝配從減數分裂前期I開始，并從偶線期開始組裝，粗線期趨于成熟并發揮功能，到雙線期開始解體。植物中研究表明，從偶線期到粗線期，組成側向元件的同源染色體被橫向纖維蛋白緊密的聯系在一起，而中央元件蛋白則形成在中心位置；到了粗線期晚期，聯會復合體將逐漸解體；到了雙線期，聯會復合體基本上已經完全解體了，而同源染色體則仍然被交叉結所維系在一起，這一過程對于同源染色體的正確分離是至關重要的。減數分裂的重要意義在于不僅使后代的染色體數目保持恒定，又通過同源重組使個體間的遺傳物質在雙親染色體之間發生交換，從而維持了物種的遺傳多樣性并促進了物種的進化。對于動植物來說，減數分裂這一最基本特征給遺傳改良帶來了無限廣闊的機遇。水稻OsP31就是一個在水稻花粉發育過程中起重要控制作用的關鍵基因(GeneID：4338221)，充分研究該基因將為在水稻雄性不育系的創新提供種質資源。

隨著對育性機制研究的不斷深入，在水稻減數分裂進程中相關蛋白的表達變化屬于極其靈敏的指標，通過研究這些基因的多克隆抗體在細胞學水平上的分布和變化情況將有利于研究者和育種家進一步充分認識水稻育性發育的機理機制，而以往對于育性過程中的基因的研究局限于細胞學表型觀察，花藥形態分析以及基因表達變化研究等，這些研究僅能說明該蛋白功能上的變化，并不能充分反映相關特異性蛋白在其特異組織時空變化情況，也不能完整反映在整個減數分裂中的變化情況；此外，這些蛋白在細胞學水平上與其他減數分裂育性蛋白的關系也無法明確。

發明內容

本發明所要解決的技術問題在于提供一種抗水稻育性蛋白OsP31多克隆抗體。本發明所要解決的另一技術問題在于提供制備所述抗水稻育性發育蛋白OsP31多克隆抗體的方法。本發明還要解決的最后一個技術問題在于提供所述抗水稻育性蛋白OsP31多克隆抗體的具體應用。

為解決上述技術問題，本發明所采用的技術方案如下：

一種水稻OsP31蛋白的免疫抗原，其氨基酸序列如SEQ ID NO.15所示。

含有所述免疫抗原的免疫組合物。

含有編碼所述多肽的核酸分子的表達盒、重組載體、重組微生物或重組細胞系。

一種抗水稻育性發育蛋白OsP31多克隆抗體的制備方法，使用氨基酸序列如SEQID NO.15所示的水稻OsP31蛋白的免疫抗原或其組合物免疫哺乳動物。

進一步地，所述方法具體包括：