[發明專利]一種羊肉中氯化煙堿類藥物及其代謝產物的檢測方法

在審

• 申請號: 202110057417.1
• 申請日: 2021-01-15
• 公開（公告）號: CN112881554A
• 公開（公告）日: 2021-06-01
• 發明（設計）人: 賈瑋;王新;石青云;石琳
• 申請（專利權）人: 陜西科技大學
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/14;G01N30/04;G01N30/34;G01N30/86;G01N30/72;G01N30/88
• 代理公司: 西安通大專利代理有限責任公司 61200
• 代理人: 馬貴香

1.一種羊肉中氯化煙堿類藥物及其代謝產物的檢測方法，其特征在于，包括如下步驟：

步驟1，將羊肉形成的勻漿后用乙腈的乙酸溶液進行渦旋，得到混合體系A，在混合體系A中加入無水硫酸鎂、乙酸鈉渦旋后振蕩提取，得到提取液，將提取液離心后得到混合體系B；

步驟2，在混合體系B中加入乙二胺-N-丙基硅膠、十八烷基三氯硅烷和MgSO₄，得到混合體系C，將混合體系C渦旋后進行離心，提取上清液得到提取液；

步驟3，將提取液用乙酸銨溶液稀釋后過濾，過濾后的溶液在超高效液相色譜-四極桿靜電場軌道離子阱質譜中進行測定，得到羊肉中11種氯化煙堿類藥物及其代謝產物的色譜峰、全掃描質荷比和二級特征斷裂片段，11種氯化煙堿類藥物及其代謝產物分別為吡蟲啉、吡蟲啉尿素、五羥基吡蟲啉、煙堿吡蟲啉、啶蟲脒、啶蟲脒-代謝物-IM-1-4、啶蟲脒-代謝物-IM-1-2、啶蟲脒-代謝物-6-氟煙酸、啶蟲脒-代謝物-IM-2-1、呋蟲胺和呋蟲胺-代謝物-UF；

將11種氯化煙堿類藥物及其代謝產物的標準溶液用乙酸銨溶液稀釋后，得到對應的稀釋液，所有的稀釋液分別在超高效液相色譜-四極桿靜電場軌道離子阱質譜中進行測定，獲得對應物質的色譜峰、全掃描質荷比、二級特征斷裂片段和斷裂途徑，所有物質的色譜峰、全掃描質荷比、二級特征斷裂片段形成標準物質數據庫；

步驟4，將步驟3得到的色譜峰一一進行提取，得到對應的呈正態分布的色譜峰，將每個呈正態分布的色譜峰與標準物質數據庫中的色譜峰進行對比，得到每個所述色譜峰對應的物質的類別，再通過步驟3得到的色譜峰的保留時間、全掃描質荷比、二級特征斷裂片段與標準物質數據庫中色譜峰的保留時間、全掃描質荷比、二級特征斷裂片段，以及斷裂途徑進行比對，得到每個所述色譜峰對應的物質的分子式，完成對步驟3中色譜峰與對應氯化煙堿類藥物及其代謝產物的一一對應；

步驟5，用每個待檢測物質對應的色譜峰的峰面積與相應物質的色譜峰的峰面積比值乘以相應物質的標準溶液濃度，得到提取液中每個氯化煙堿類藥物或其代謝產物的濃度，最后用如下公式得到羊肉中每個氯化煙堿類藥物或其代謝產物的濃度，完成對羊肉中氯化煙堿類藥物及其代謝產物的檢測；

c_i＝(c₀v)/m，其中c_i為羊肉中每個氯化煙堿類藥物或其代謝產物的濃度，單位為μg/kg，c₀為提取液中每個氯化煙堿類藥物或其代謝產物的濃度，單位為μg/L，v為步驟3中所述提取液的體積，單位為L，m為步驟1中所述羊肉的質量，單位為kg。

2.根據權利要求1所述的羊肉中氯化煙堿類藥物及其代謝產物的檢測方法，其特征在于，步驟1中羊肉、無水硫酸鎂和乙酸鈉的質量比為(5～10):(5～6):(2～3)；步驟2中乙二胺-N-丙基硅膠、十八烷基三氯硅烷、MgSO₄和羊肉的質量比為(0.3～0.4):(0.2～0.4):(0.6～0.8):(5～10)。

3.根據權利要求1所述的羊肉中氯化煙堿類藥物及其代謝產物的檢測方法，其特征在于，步驟1中所述的乙腈的乙酸溶液中乙腈與乙酸的體積比為1％，乙腈的乙酸溶液與羊肉的比例為(5～20)mL:(5～10)g。

4.根據權利要求1所述的羊肉中氯化煙堿類藥物及其代謝產物的檢測方法，其特征在于，步驟3中超高效液相色譜選取Accucore aQ，具體條件如下所示，超高效液相色譜的柱溫為50～55℃，噴霧電壓為4～5kV，離子源溫度為60～65℃，毛細管溫度為325～375℃；

四極桿靜電場軌道離子阱質譜采用兩級掃描方式，二級掃描方式為可變的數據非依賴采集，掃描時間為0～20min；分辨率采用95000FWHM，分為兩個質量掃描片段：m/z＝150-550設定為第一個掃描，隔離窗口范圍設為54Da，相應循環計數設定為9個，m/z＝600-900設為第二個掃描，隔離窗口范圍設為104Da，相應循環計數設定為4個。