[發明專利]一種高效清除細菌生物被膜的方法

在審

• 申請號: 202110056005.6
• 申請日: 2021-01-15
• 公開（公告）號: CN112806519A
• 公開（公告）日: 2021-05-18
• 發明（設計）人: 趙勇;童金蓉;黃振華;趙晟;張昭寰;韓喬
• 申請（專利權）人: 上海海洋大學
• 主分類號: A23L5/20
• 分類號: A23L5/20;A01N59/00;A01P1/00
• 代理公司: 上海伯瑞杰知識產權代理有限公司 31227
• 代理人: 周一新

本發明公開了一種高效清除細菌生物被膜的方法，屬于微生物領域。該方法采用二槽隔膜電解水裝置制得酸性電解水，用其迅速處理生物被膜不低于5min，再用含0.5g/100mL NaS₂O₃的PBS緩沖液中和不低于5min，其中生物被膜為預形成、包含有被膜菌且經無菌磷酸緩沖溶液PBS洗滌去除未附著菌的生物被膜。本發明利用酸性電解水具有低pH值、高氧化還原電位和一定的有效氯等特性以達到破壞生物被膜和清除被膜菌的雙重功效，高效且安全。

技術領域

本發明屬于微生物領域，涉及一種高效清除細菌生物被膜的方法。

背景技術

食源性病原菌是引起食源性疾病的首要原因。在食品加工環境中，引起食品污染機會較多的大腸桿菌、單增李斯特菌和副溶血性弧菌等常見的食源性致病菌，它們在一定的條件下黏附在食品、加工接觸面及非食品加工接觸面(如墻壁、下水道、死角等地方)后形成生物被膜。生物被膜是指細菌附著于接觸物體表面分泌多糖、蛋白質等多聚物，并將自身包裹其中的膜狀物，絕大多數的細菌都是以生物被膜的形式附著在自然環境中有生命和無生命的物體表面的方式而存在，這種生活方式可以幫助其抵抗環境中各種不利因素如過酸或過堿的環境。但是，被膜菌對消毒劑的抵抗力是浮游細菌的數百倍甚至上千倍，由于其難以去除的特性，即使在食品加工中經過嚴格的清洗消毒工序，生物被膜還有可能逗留在食品接觸表面并危害食品安全。據估計，約65％人類細菌性感染是由生物被膜引起的，在食品工業中形成的生物被膜是引起食源性疾病的罪魁禍首。

胞外多糖在形成生物被膜與抵抗外界壓力中起重要作用，其可以阻止抗生素、消毒劑等接觸包裹于被膜內的細菌從而起到屏蔽作用，消弱它們對被膜菌的殺傷效應，不僅使得細菌生物被膜對外界壓力的抗性增加，并且能夠保護生物被膜結構的完整性。因此控制食品中各種致病菌的污染，特別是通過破壞胞外多糖來防止其形成生物被膜交叉污染食品，是控制食源性疾病發生的重要內容。常見的控制生物被膜方法有高壓噴射處理、亞硝酸、過氧化氫和次氯酸等，這些方法對生物被膜有一定的破壞作用，二氧化氯和檸檬酸/亞甲基藍/對羥基苯甲酸能有效殺滅包括被膜菌，但這些方法不同時具備破壞生物被膜胞外多糖和清除被膜菌的雙重作用。酸性電解水被視為一種環境友好型的殺菌劑，具有低pH值、高氧化還原電位和一定的有效氯等特點，其主要通過干擾膜的平衡使微生物的細胞膜電位發生改變，導致細胞通透性增強、細菌腫脹及細胞代謝酶的破壞，胞內物質溢出、溶解，從而達到殺滅微生物的作用。酸性電解水已廣泛應用于醫療、食品加工、環境衛生等行業的殺菌消毒，具有殺菌力強、譜廣、迅速等特點，但酸性電解水對食源性致病菌生物被膜的清除作用少見報道。

發明內容

本發明的目的在于提供一種高效清除細菌生物被膜的方法，同時具備破壞細菌尤其是食源性致病菌生物被膜胞外多糖和清除被膜菌的雙重作用。

為實現上述目的，本發明提供的技術方案是：

一種高效清除細菌生物被膜的方法，先用酸性電解水處理生物被膜不低于5min，再用含0.5g/100mL NaS₂O₃的PBS緩沖液中和不低于5min；所述生物被膜為預形成、包含有被膜菌且經無菌磷酸緩沖溶液PBS洗滌已去除未附著菌的生物被膜。

優選地，所述酸性電解水由二槽隔膜電解水裝置制得。

優選地，所述細菌選自大腸桿菌、副溶血性弧菌或單增李斯特菌。

更優選地，所述細菌選自大腸桿菌ATCC 25404、副溶血性弧菌S36或單增李斯特菌WaX12。

優選地，所述酸性電解水迅速處理生物被膜5min。

優選地，所述PBS緩沖液中和5min。

與現有技術相比，本發明的有益效果在于：酸性電解水具有低pH值、高氧化還原電位和一定的有效氯等特性，是一種環保、廉價、易獲取的生化制劑，通過其清除細菌生物被膜，具有在短時間內破壞生物被膜和清除被膜菌的雙重功效。