[發(fā)明專利]PCR連續(xù)反應(yīng)的控制方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202110055539.7
• 申請日: 2021-01-15
• 公開（公告）號: CN113174428B
• 公開（公告）日: 2021-12-31
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 任魯風(fēng);李潔昆;蔡亦梅;蔣鵬翀;張瑜;高靜;范東雨;賈欣月;金鑫浩
• 申請（專利權(quán)）人: 北京中科生儀科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/686
• 分類號: C12Q1/686;C12N15/10;C12M1/38;C12M1/36
• 代理公司: 北京精金石知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11470
• 代理人: 姜艷華

本發(fā)明涉及一種PCR連續(xù)反應(yīng)的控制方法，該P(yáng)CR連續(xù)反應(yīng)的控制方法包括：通過加樣孔向管路層注入樣品，通過第一試劑管向管路層注入裂解液，形成生成物；通過與第一試劑管連接的第一活塞拉出，將生成物沿著管路推入純化倉；啟動超聲單元，超聲單元設(shè)置在純化倉的下方，超聲單元將純化倉內(nèi)的磁珠打散，使得生成物中的核酸物質(zhì)吸附在磁珠的表面；啟動磁吸單元，將磁吸單元內(nèi)的磁鐵推至純化倉的下方，吸住磁珠；將第三試劑管內(nèi)的清洗液推入純化倉，進(jìn)行至少一次清洗；將核酸物質(zhì)洗脫，使其與磁珠分離；將核酸推入管路層內(nèi)的擴(kuò)增倉；實現(xiàn)擴(kuò)增反應(yīng)。本發(fā)明實現(xiàn)對PCR連續(xù)反應(yīng)的控制，反應(yīng)過程管路集成化程度較高，操作簡單，易于實現(xiàn)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物檢測領(lǐng)域，尤其涉及一種PCR連續(xù)反應(yīng)的控制方法。

背景技術(shù)

核酸的提取、純化、擴(kuò)增是核酸檢測試驗的一項常規(guī)操作，也是基因分析過程中十分關(guān)鍵的步驟。基因分析過程中常常需要將特定的核酸片段從混合樣品中分離提取出來，用于后續(xù)的PCR擴(kuò)增，因此核酸的純化回收效果直接影響到整個基因分析過程的進(jìn)程和結(jié)果。

中國專利公開了一種核酸自動檢測裝置，包括固定座及豎直固定于固定座上的主支撐板、樣品反應(yīng)自動機(jī)構(gòu)及其固定架、核酸檢測光路結(jié)構(gòu)及其承載架和控制器；樣品反應(yīng)自動機(jī)構(gòu)固定架固定于主支撐板上，樣品反應(yīng)自動機(jī)構(gòu)的出口向固定架的下方延伸并位于固定架架體之外；核酸檢測光路結(jié)構(gòu)承載架位于樣品反應(yīng)自動機(jī)構(gòu)出口的下方并與主支撐板固定連接，核酸檢測光路結(jié)構(gòu)的入口與樣品反應(yīng)自動機(jī)構(gòu)的出口連接；控制器設(shè)置于固定座上，并分別與樣品反應(yīng)自動機(jī)構(gòu)及核酸檢測光路結(jié)構(gòu)電連接。

上述技術(shù)方案中，一方面，檢測裝置對環(huán)境要求高，測試精度低，同時，芯片內(nèi)部管路沒有集成化，反應(yīng)液難以按照預(yù)期進(jìn)行混合及測試，且通常核酸的提取、純化、擴(kuò)增需要利用不同的儀器來完成，操作繁瑣。

發(fā)明內(nèi)容

為此，本發(fā)明提供一種PCR連續(xù)反應(yīng)的控制方法，可以實現(xiàn)對PCR連續(xù)反應(yīng)的控制，便捷高效。

為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供一種PCR連續(xù)反應(yīng)的控制方法，包括：通過加樣孔向管路層注入樣品，通過第一試劑管向所述管路層注入裂解液，所述樣品和所述裂解液在所述管路層內(nèi)混合反應(yīng)，形成生成物；通過與所述第一試劑管連接的第一活塞拉出，以及與所述加樣孔連通的第二試劑管內(nèi)設(shè)置的第二活塞推入，將所述生成物沿著管路推入純化倉；啟動超聲單元，所述超聲單元設(shè)置在所述純化倉的下方，所述超聲單元將所述純化倉內(nèi)的磁珠打散，使得生成物吸附在所述磁珠的表面；啟動磁吸單元，將所述磁吸單元內(nèi)的磁鐵推至所述純化倉的下方，吸住所述磁珠；將第三試劑管內(nèi)的清洗液在第三活塞的推動下，推入所述純化倉，對所述純化倉內(nèi)的磁珠進(jìn)行至少一次清洗；將第四試劑管內(nèi)的洗脫液在第四活塞的推動下，推入所述純化倉，將所述磁珠上的所吸附的核酸物質(zhì)洗脫，使其與所述磁珠分離；通過第二試劑管連接的第二活塞推入，將洗脫后的所述核酸推入管路層內(nèi)的擴(kuò)增倉；利用激發(fā)光源激發(fā)所述擴(kuò)增倉內(nèi)的核酸，實現(xiàn)擴(kuò)增反應(yīng)；

建立所述超聲單元、所述磁吸單元和所述溫控單元與中控單元的連接，所述溫控單元設(shè)置在所述擴(kuò)增倉的下方，用以對所述擴(kuò)增倉內(nèi)的溫度進(jìn)行控制，所述中控單元內(nèi)設(shè)置有標(biāo)準(zhǔn)反應(yīng)矩陣R0(F0，L0，T0)和時間矩陣t(t1，t2，t3)，其中，F(xiàn)0表示所述超聲單元的標(biāo)準(zhǔn)振動頻率，L0表示所述磁吸單元的標(biāo)準(zhǔn)位置，T0表示所述溫控單元的標(biāo)準(zhǔn)溫度，t1表示超聲單元的振動時間，t2表示當(dāng)所述超聲單元停止振動后啟動所述磁吸單元的時間間隔，t3表示所述磁吸單元停止工作后啟動所述溫控單元的時間間隔；

在反應(yīng)過程中，若所述超聲單元的實時振動頻率F低于所述超聲單元的標(biāo)準(zhǔn)振動頻率F0，則增加所述超聲單元的振動時間t11，更新所述中控單元內(nèi)的時間矩陣t1(t11，t2，t3),所述超聲單元的振動時間t11＝t1(1+F/F0)，啟動所述磁吸單元的時間間隔為t21＝t2(1-F/F0)，所述溫控單元的時間間隔為t31＝t3(1-F/F0)；