[發明專利]用于Nrf2降解劑的篩選體系、表達載體、宿主細胞及方法

在審

• 申請號: 202110055310.3
• 申請日: 2021-01-15
• 公開（公告）號: CN112662693A
• 公開（公告）日: 2021-04-16
• 發明（設計）人: 黃瑾;盧偉強;胡倩;康天裕
• 申請（專利權）人: 華東理工大學
• 主分類號: C12N15/65
• 分類號: C12N15/65;C12N15/62;C12N15/85;C12N5/10
• 代理公司: 上海智信專利代理有限公司 31002
• 代理人: 鄭暄;豆欣欣

1.一種用于Nrf2降解劑的篩選體系，其特征在于，所述的篩選體系包括A熒光蛋白基因序列、B熒光蛋白與含Nrf2蛋白的融合蛋白基因序列、以及IRES基因序列，A熒光蛋白基因序列、融合有B熒光蛋白的Nrf2蛋白基因序列獨立表達，且由IRES基因序列連接。

2.根據權利要求1所述的用于Nrf2降解劑的篩選體系，其特征在于，所述的含Nrf2蛋白的基因序列選自以下序列的一種，

如SEQ NO.1所示的具有Nrf2蛋白的全長序列；

如SEQ NO.2所示的Nrf2功能片段序列Neh1；

如SEQ NO.3所示的Nrf2功能片段序列Neh2；

如SEQ NO.4所示的Nrf2功能片段序列Neh3；

如SEQ NO.5所示的Nrf2功能片段序列Neh4；

如SEQ NO.6所示的Nrf2功能片段序列Neh5；

如SEQ NO.7所示的Nrf2功能片段序列Neh6；

如SEQ NO.8所示的Nrf2功能片段序列Neh7；

與全長序列或各功能片段序列有30％～90％序列相同性的序列。

3.根據權利要求1所述的用于Nrf2降解劑的篩選體系，其特征在于，A/B熒光蛋白的組合選擇以下組合的一種：

DsRed/EGFP，mCherry/EGFP，DsRed/YFP，mCherry/YFP，DsRed/GFP，mCherry/EGFP，DsRed/YFP，mCherry/YFP；

DsRed熒光蛋白序列如SEQ NO.9所示；

mCherry熒光蛋白序列如SEQ NO.10所示；

EGFP熒光蛋白序列如SEQ NO.11所示；

YFP熒光蛋白序列如SEQ NO.12所示；

GFP熒光蛋白序列如SEQ NO.13所示。

4.根據權利要求1所述的用于Nrf2降解劑的篩選體系，其特征在于，B熒光蛋白的序列在含Nrf2蛋白的序列的C端或N端；B熒光蛋白與含Nrf2蛋白的融合蛋白基因序列在IRES基因序列的C端或N端。

5.根據權利要求1所述的用于Nrf2降解劑的篩選體系，其特征在于，含Nrf2蛋白的基因序列與B熒光蛋白的序列之間以Linker連接，在促使含Nrf2蛋白與B熒光蛋白形成融合蛋白的同時不影響含Nrf2蛋白的表達及功能。

6.一種表達權利要求1至5中任一項所述的用于Nrf2降解劑的篩選體系的表達載體。

7.一種表達權利要求1至5中任一項所述的用于Nrf2降解劑的篩選體系的宿主細胞。

8.一種篩選Nrf2降解劑的方法，其特征在于，采用權利要求6所述的表達載體或權利要求7所述的宿主細胞進行篩選。