[發(fā)明專利]基于核酸適配體和量子點淬滅效應(yīng)的C反應(yīng)蛋白檢測試劑及方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202110054144.5
• 申請日: 2021-01-15
• 公開（公告）號: CN113155788B
• 公開（公告）日: 2023-03-21
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 韋學(xué)勇;陳軒;劉湘連;蔣莊德
• 申請（專利權(quán)）人: 西安交通大學(xué)
• 主分類號: G01N21/64
• 分類號: G01N21/64
• 代理公司: 西安智大知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所 61215
• 代理人: 賀建斌

1.一種基于核酸適配體和量子點淬滅效應(yīng)的C反應(yīng)蛋白檢測試劑，其特征在于：由巰基和氨基分別修飾兩端的C反應(yīng)蛋白核酸適配體與羧基化量子點和納米金顆粒結(jié)合后形成的生物探針，和C反應(yīng)蛋白核酸適配體的一小段互補DNA鏈構(gòu)成；

其中所述的生物探針的制備方法，包括以下步驟：

（1）將等體積的100μMC反應(yīng)蛋白核酸適配體與20mM三(2-羧乙基)膦混合并在室溫下孵育30分鐘以還原二硫鍵，得到第一混合溶液；

（2）將納米金溶液與第一混合溶液混合，使得納米金與C反應(yīng)蛋白核酸適配體的比例為1:1-1:500，比例根據(jù)納米金大小調(diào)整，并加入1M氯化鈉溶液至氯化鈉的濃度為50mM，室溫下振蕩1h后再次加入1M氯化鈉溶液至氯化鈉的濃度為100mM，重復(fù)上述操作至氯化鈉最終濃度達(dá)到300mM；室溫下孵育過夜，使得C反應(yīng)蛋白核酸適配體與納米金顆粒結(jié)合，得到第二混合溶液；

（3）將第二混合溶液經(jīng)離心除去上層透明溶液，并將底部深紅色沉淀分散于超純水中，重復(fù)清洗，得到納米金修飾的C反應(yīng)蛋白核酸適配體；

（4）將羧基化量子點用1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽（EDC）和N-羥基琥珀酰亞胺（NHS）激活后與納米金修飾的C反應(yīng)蛋白核酸適配體混合并攪拌得到第三混合溶液；

（5）將第三混合溶液與C反應(yīng)蛋白核酸適配體的小段互補DNA鏈混合并攪拌，使得C反應(yīng)蛋白核酸適配體與該核酸適配體的小段互補DNA鏈濃度比為1:1，得到第四混合溶液；

（6）將第四混合溶液用超濾離心管離心過濾后清洗三次以上，得到巰基和氨基分別修飾兩端的C反應(yīng)蛋白核酸適配體與羧基化量子點和納米金顆粒結(jié)合后形成的生物探針。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測試劑，其特征在于：所述的巰基和氨基修飾兩端的C反應(yīng)蛋白核酸適配體的DNA序列為:5’-C6-NH2-CGA AGG GGA TTC GAG GGG TGA TTG CGT GCTCCA TTT GGT G-SH-C6-3’；所述的核酸適配體的一小段互補DNA鏈序列為：5’-CTCGAATCCCCTTCG-3’。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測試劑，其特征在于：所述的納米金溶液的制備方法為：將100mL HAuCl₄溶液加熱至80℃回流并攪拌，隨后加入10mL 38.8 mM檸檬酸鈉溶液后攪拌至溶液變成深紅色。

4.利用權(quán)利要求1所述的一種基于核酸適配體和量子點淬滅效應(yīng)的C反應(yīng)蛋白檢測試劑的檢測方法，其特征在于，包括以下步驟：

（1）將多個已知濃度的C反應(yīng)蛋白標(biāo)準(zhǔn)溶液和C反應(yīng)蛋白核酸適配體和羧基化量子點與納米金顆粒結(jié)合后形成的生物探針混合至1mL并靜置孵育，得到第五混合溶液；

（2）檢測第五混合溶液一定波長激發(fā)光照射下的發(fā)射熒光光譜，以C反應(yīng)蛋白標(biāo)準(zhǔn)液濃度為橫坐標(biāo)，檢測得到的熒光強度值作為縱坐標(biāo)，繪制熒光強度與C反應(yīng)蛋白濃度的線性關(guān)系曲線；

（3）以步驟（1）和步驟（2）的方法檢測待測樣品中的C反應(yīng)蛋白濃度，將測得的熒光強度帶入步驟（2）的線性關(guān)系曲線中即得到待測樣的C反應(yīng)蛋白濃度。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的檢測方法，其特征在于：所述的一定波長激發(fā)光的波長為量子點的激發(fā)波長。

6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的檢測方法，其特征在于：所述的熒光強度值是發(fā)射熒光光譜峰值處的熒光強度。