[發明專利]膜狀固定化細胞、多肽、寡肽或蛋白質及其制備方法

在審

• 申請號: 202110053912.5
• 申請日: 2021-01-15
• 公開（公告）號: CN114763543A
• 公開（公告）日: 2022-07-19
• 發明（設計）人: 張仲康;王駿
• 申請（專利權）人: 百瑞全球有限公司
• 主分類號: C12N11/10
• 分類號: C12N11/10;C07K17/10
• 代理公司: 北京天昊聯合知識產權代理有限公司 11112
• 代理人: 王靜;高釗

本發明提供了膜狀固定化細胞、多肽、寡肽或蛋白質及制備方法。該方法包括1)提供未成膜的殼聚糖，其中所述殼聚糖為未經預交聯的殼聚糖或經預交聯的殼聚糖；2)提供所述未成膜的殼聚糖與細胞、多肽、寡肽或蛋白質的混合液，其中在所述混合液中，所述未成膜的殼聚糖為溶解狀態；3)將交聯劑與所述混合液混合，得到所述殼聚糖與所述細胞、多肽、寡肽或蛋白質的共交聯產物；4)將所述共交聯產物干燥，得到膜狀固定化細胞、多肽、寡肽或蛋白質；其中，當步驟1)使用未經預交聯的殼聚糖時，該方法還包括5)將所述膜狀固定化細胞、多肽、寡肽或蛋白質與磷酸鹽混合，使其中的殼聚糖分子之間進行交聯。所述方法為一步法，工藝簡單，節省時間和成本。

技術領域

本發明屬于固定化細胞和固定化蛋白領域，具體而言，涉及膜狀固定化細胞、多肽、寡肽或蛋白質及其制備方法。

背景技術

酶的應用越趨廣泛，而固定化酶因其易于與產品分離并可重復使用，所以常用于工業用途以減低生產成本。酶的固定化方法眾多，如物理吸附、親和聯結、共價交聯、凝絮包埋等(參見文獻“Roger A.Sheldon,2007,Advanced SynthesisCatalysis,349:1289-1307”)。

現有的載體的制作過程復雜，例如：制備硅載體需要使用多種有機溶液(袁中一、吳星佳、李士蕓、吉鑫松，“一種珠狀殼聚糖載體的制備及其應用于酶固定化的方法”，中國專利申請公開號：

CN1407103A)；制備多孔復合氧化物需要使用高溫高壓(權鎬真、洪舜教、白桂東、金惠真、樸東坤，“多孔復合氧化物制造方法”，中國專利申請公開號：CN1171295A)。而一般凝膠載體制作過程簡單，只需使把凝膠溶液用注射器滴入能使其凝膠化的溶液制成凝膠顆粒即可。例如：把海藻酸鈉滴入氯化鈣溶液、把卡拉膠滴入氯化鉀溶液。不過這種技術在工業生產時需要設計特定的設備進行生產(曾昭景、歐陽平凱、潘光亮，“固定化細胞載體成型機”，中國專利申請公開號：CN2181511Y)，這大大增加了生產成本。因此，制備簡單及低生產成本的固定化方法一直是本領域研究人員的目標。

發明內容

為解決上述現有技術中所存在的問題，本發明提供了膜狀固定化細胞、多肽、寡肽或蛋白質及其制備方法。

具體而言，本發明提供了：

(1)一種制備膜狀固定化細胞、多肽、寡肽或蛋白質的方法，包括以下步驟：

1)提供未成膜的殼聚糖，其中所述殼聚糖為未經預交聯的殼聚糖或經預交聯的殼聚糖；

2)提供所述未成膜的殼聚糖與細胞、多肽、寡肽或蛋白質的混合液，其中在所述混合液中，所述未成膜的殼聚糖為溶解狀態；

3)將交聯劑與所述混合液混合，得到所述殼聚糖與所述細胞、多肽、寡肽或蛋白質的共交聯產物；

4)將所述共交聯產物干燥，得到膜狀固定化細胞、多肽、寡肽或蛋白質；

其中，當步驟1)使用未經預交聯的殼聚糖時，所述方法還包括：

5)將步驟4)所得膜狀固定化細胞、多肽、寡肽或蛋白質與磷酸鹽混合，使其中的殼聚糖分子之間進行交聯。

(2)根據(1)所述的方法，其中通過將磷酸鹽與未經預交聯的殼聚糖混合來制備所述經預交聯的殼聚糖。

(3)根據(1)或(2)所述的方法，其中所述磷酸鹽與所述未經預交聯的殼聚糖的重量比為(0.1-20):1。

(4)根據(1)或(2)所述的方法，其中所述磷酸鹽選自多聚磷酸鹽、多偏磷酸鹽和焦磷酸鹽中的一種或多種。

(5)根據(1)所述的方法，其中步驟3)中所述交聯劑包括多元醛化合物和京尼平。

(6)根據(1)所述的方法，其中所述未成膜的殼聚糖包括殼聚糖粉末和殼聚糖溶液。