[發(fā)明專利]一種定量檢測水產(chǎn)品中吡咯素和甲基乙二醛氫咪唑酮的方法有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 202110053268.1 | 申請日： | 2021-01-15 |
| 公開（公告）號： | CN112881581B | 公開（公告）日： | 2022-04-01 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 董士遠(yuǎn);王雪陽;曾名湧;王盛;劉芹邑;湯明俊;周鵬程 | 申請（專利權(quán)）人： | 中國海洋大學(xué) |
| 主分類號： | G01N30/88 | 分類號： | G01N30/88;G01N30/06;G01N30/14;G01N30/34 |
| 代理公司： | 青島致嘉知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 37236 | 代理人： | 苗穎 |
| 地址： | 266100 *** | 國省代碼： | 山東;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 定量 檢測 水產(chǎn)品 吡咯 甲基 乙二醛氫 咪唑 方法 | ||
1.一種定量檢測水產(chǎn)品中吡咯素和甲基乙二醛氫咪唑酮的方法，其特征在于，步驟如下：
步驟1：樣品中吡咯素和甲基乙二醛氫咪唑酮的提取
1.1采用酶解法提取樣品中吡咯素和甲基乙二醛氫咪唑酮；
1.2向酶解后的樣品溶液中加入內(nèi)標(biāo)用以校正誤差，并過濾膜除去雜質(zhì)；
1.3加標(biāo)后的樣品溶液過固相萃取柱進(jìn)行萃取，收集洗脫液；
步驟2：將步驟1獲得的洗脫液利用液相-質(zhì)譜聯(lián)用進(jìn)行定量檢測；
步驟3：繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線：向系列濃度梯度標(biāo)準(zhǔn)溶液中加入內(nèi)標(biāo)后采用液相-質(zhì)譜聯(lián)用進(jìn)行檢測，以標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度與內(nèi)標(biāo)濃度比為橫坐標(biāo)，標(biāo)準(zhǔn)溶液峰面積與內(nèi)標(biāo)峰面積比為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到方程；
步驟4：將步驟2獲得的檢測數(shù)據(jù)對照步驟3的標(biāo)準(zhǔn)曲線和方程，計(jì)算獲得樣品中吡咯素和甲基乙二醛氫咪唑酮的濃度；
所述酶解法提取樣品中的吡咯素和甲基乙二醛氫咪唑酮具體操作為：
①稱取20mg樣品于1mL 20mM HCl溶液中，分別加入40μL 6mg/mL胃蛋白酶溶液和20μL2mg/mL百里香酚溶液，充入氮?dú)猓杆俜饪冢缓?7℃震搖24h；
②用260mM KOH溶液將步驟①反應(yīng)后的體系pH調(diào)至7.4，加入300μL 0.5M磷酸鉀緩沖液和1mL 2mg/mL鏈酶蛋白酶-XIV型溶液，充入氮?dú)猓杆俜饪冢缓?7℃震搖24h；
③向步驟②反應(yīng)后的體系中依次加入100μL亮氨酸氨基肽酶M-VI-S型溶液和50μL脯氨酸肽酶溶液，然后充入氮?dú)猓杆俜饪冢?7℃震搖24h；
所述固相萃取柱為CNW Poly-Sery HLB Pro，規(guī)格為60mg/3mL；
所述固相萃取柱萃取方法為：
取3mL甲醇活化HLB Pro萃取柱，然后取3mL超純水平衡HLB Pro萃取柱，取1mL步驟1.2加標(biāo)后的酶解樣品溶液，過HLB Pro萃取柱，取3mL超純水除雜，然后用3mL 5％氨水甲醇溶液洗脫，收集洗脫液于60℃氮吹干燥，最后復(fù)溶于10％乙腈水溶液；
所述液相-質(zhì)譜聯(lián)用的液相色譜條件為：
色譜柱：Waters Atlantis T3，2.1×150mm,5μm；流動(dòng)相：含0.1％甲酸和10％乙腈的水溶液；流速：0.2mL/min；柱溫：30℃；進(jìn)樣體積：10μL；梯度洗脫程序：等梯度洗脫。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述定量檢測水產(chǎn)品中吡咯素和甲基乙二醛氫咪唑酮的方法，其特征在于，所述步驟1中采用的內(nèi)標(biāo)為MG-H1-d3。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述定量檢測水產(chǎn)品中吡咯素和甲基乙二醛氫咪唑酮的方法，其特征在于，所述液相-質(zhì)譜聯(lián)用的質(zhì)譜條件為：
電噴霧離子源(ESI)；正離子掃描模式；多反應(yīng)監(jiān)測模式(MRM)；干燥氣溫溫度為350℃；干燥氣流速為12L/min；霧化器壓力為45psi；毛細(xì)管電壓為3500V；碎裂電壓為135V。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述定量檢測水產(chǎn)品中吡咯素和甲基乙二醛氫咪唑酮的方法，其特征在于，液相-質(zhì)譜聯(lián)用中吡咯素母離子質(zhì)荷比為255，定量檢測特征碎片離子質(zhì)荷比為175；定性檢測特征碎片離子質(zhì)荷比為237；甲基乙二醛氫咪唑酮母離子質(zhì)荷比為229，定量檢測特征碎片離子質(zhì)荷比為70，定性檢測特征碎片離子質(zhì)荷比為114。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述定量檢測水產(chǎn)品中吡咯素和甲基乙二醛氫咪唑酮的方法，其特征在于，所述標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制中標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度范圍為0.01-1μg/mL。
6.根據(jù)權(quán)利要求1-5任一項(xiàng)所述定量檢測水產(chǎn)品中吡咯素和甲基乙二醛氫咪唑酮的方法，其特征在于，所述水產(chǎn)品為鱘魚。
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