[發(fā)明專利]條件培養(yǎng)基、凍干粉及制備方法和應用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202110052714.7
• 申請日: 2021-01-15
• 公開（公告）號: CN112695013A
• 公開（公告）日: 2021-04-23
• 發(fā)明（設計）人: 張京鐘;余爽;汪婧雯
• 申請（專利權）人: 蘇州京賽諾生物科技有限公司
• 主分類號: C12N5/0775
• 分類號: C12N5/0775;A61K35/28;A61K9/19;A61P17/18;A61P17/00;A61K8/99;A61K8/98;A61K8/02;A61Q19/00;A61Q19/08
• 代理公司: 蘇州知途知識產(chǎn)權代理事務所(普通合伙) 32299
• 代理人: 孫占莉;時萌萌

本申請涉及一種基于人脂肪間充質(zhì)干細胞條件培養(yǎng)基、凍干粉及制備方法和應用。具體的本發(fā)明提供了了人脂肪來源的間充質(zhì)干細胞和人真皮成纖維細胞的制備及傳代培養(yǎng)的方法，同時篩選出凍干粉保護添加劑的最佳種類和比例，以及條件培養(yǎng)基使用的最佳稀釋比例。本發(fā)明提供的培養(yǎng)基能顯著提高間充質(zhì)干細胞的貼壁性能和增殖速率；本發(fā)明提供的條件培養(yǎng)基凍干粉具有顯著的抗衰老作用。

技術領域

本申請屬于干細胞技術領域，尤其是涉及一種基于人脂肪間充質(zhì)干細胞條件培養(yǎng)基的凍干粉及其抗氧化衰老作用。

背景技術

衰老伴隨著多個器官結構與功能的逐漸喪失。皮膚是人體最大的器官，皮膚的衰老是機體衰老最直觀的表現(xiàn)，其主要特征是皮膚干燥粗糙、彈性減弱、松弛、皺紋加深等。隨著生活水平的不斷提高，人們比以往更加注重皮膚及身體的保養(yǎng)，因此開發(fā)新的抗皮膚衰老治療手段具有重要的研究意義和較好的臨床應用前景。

皮膚老化是一個復雜的過程，包括內(nèi)源性老化和外源性老化。內(nèi)源性老化即年齡增長等因素引起的自然衰老；外源性老化是指外界環(huán)境刺激引起的皮膚衰老，包括紫外線輻射、煙霧和常見污染物(參見Tobin D J.Introduction to SKIN aging[J].Journal ofTissue Viability,2016,26(1):37-46.)，其中紫外線輻射是外源性老化的主要因素，也被稱為光老化。事實上，高達80％-90％的面部衰老是慢性紫外線輻射導致形成，紫外輻射被認為是對皮膚傷害最嚴重的損傷因素。

皮膚衰老主要是由于皮膚真皮層中細胞外基質(zhì)的改變，在真皮層中，I型膠原蛋白含量會減少，同時膠原蛋白和彈性蛋白纖維將出現(xiàn)紊亂及碎片化現(xiàn)象。皮膚成纖維細胞是皮膚真皮中的主要細胞類型，負責調(diào)節(jié)細胞外基質(zhì)、膠原蛋白產(chǎn)生和傷口愈合，在維持皮膚正常結構和功能中起重要作用。

關于皮膚老化機制的學說較多，包括染色體遺傳學說、基因調(diào)控學說、代謝失調(diào)學說和自由基學說等，當下被研究者認可度較髙、并廣泛開展研究的是氧化應激(自由基)學說。皮膚接受過多的紫外線照射后，皮膚組織細胞會產(chǎn)生氧化應激，誘導產(chǎn)生過量的活性氧簇(ROS)，ROS不僅直接損害線粒體導致能量產(chǎn)生不足，還直接損傷細胞內(nèi)多種生物大分子，減少抗氧化酶的含量，從而破壞細胞內(nèi)的抗氧化系統(tǒng)，進而引起細胞炎癥、細胞凋亡等導致皮膚衰老的內(nèi)因。

干細胞(Stem Cell)是一種具有自我更新能力和分化潛能的功能細胞，干細胞療法為多種難治性重大疾病提供了新的解決策略。間充質(zhì)干細胞是一種來源于發(fā)育早期的中胚層和神經(jīng)外胚層的多能成體干細胞，脂肪間充質(zhì)干細胞來源于脂肪組織，是繼骨髓間充質(zhì)干細胞之后在干細胞領域展開廣泛研究的一類成體干細胞，其來源豐富、易提取，是理想的種子細胞，在臨床治療中使用成體干細胞，特別是自體來源間充質(zhì)干細胞及其條件培養(yǎng)基，既可避免倫理因素的限制，也較好的規(guī)避了潛在的干細胞多向分化潛能帶來的致瘤性風險(參見Gruenloh W,Kambal A,Sondergaard C,et al.Characterization and In VivoTesting of Mesenchymal Stem Cells Derived from Human Embryonic Stem Cells[J].Tissue Engineering Part A,2011,17(11-12):1517.和Herberts C A,Kwa M S,HermsenH P.Risk factors in the development of stem cell therapy[J].Journal ofTranslational Medicine,2011,9(1):29.)。其在生長過程中能夠向培養(yǎng)液中分泌大量的生物活性物質(zhì)，這些生物活性物質(zhì)會改善其他細胞的生長狀態(tài)和生理功能，具有免疫調(diào)節(jié)能力、抗炎能力以及調(diào)節(jié)增殖等生物活性。