[發明專利]利用糖源配比優化百子蓮胚性愈傷繼代周期及頻次的方法

在審

• 申請號: 202110050591.3
• 申請日: 2021-01-14
• 公開（公告）號: CN112673960A
• 公開（公告）日: 2021-04-20
• 發明（設計）人: 岳建華;董艷;龔守富;張琰;賈亞男;鄧楠楠;施芹川;李嫚嫚
• 申請（專利權）人: 信陽農林學院
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 上海段和段律師事務所 31334
• 代理人: 李慧;郭國中

1.一種利用糖源配比優化百子蓮胚性愈傷繼代周期及頻次的方法，其特征在于，包括以下步驟：

A、外植體取材與消毒：取百子蓮未開裂的小花苞，進行消毒處理后，切取其小花梗外植體，并切成小段；

B、愈傷組織的誘導：將小段的小花梗外植體接種于愈傷組織誘導培養基中，暗培養一段時間，生成帶有殘留小花梗組織的愈傷組織；

C、愈傷組織的繼代培養：將帶有殘留小花梗組織的愈傷組織放置在愈傷組織繼代培養基上，暗培養，得不含殘留小花梗組織的愈傷組織；

D、胚性愈傷組織的誘導：將不含殘留小花梗組織的愈傷組織放置在胚性愈傷組織誘導培養基中暗培養，生成胚性愈傷組織；

E、胚性愈傷組織的繼代：將胚性愈傷組織放置在繼代保存培養基中暗培養；

F、成熟胚的誘導：將步驟E培養后得到的胚性愈傷組織放置在成熟胚誘導培養基中，暗培養一段時間后，轉至光下培養，生成成熟胚。

2.根據權利要求1所述的利用糖源配比優化百子蓮胚性愈傷繼代周期及頻次的方法，其特征在于，步驟A中，所述消毒處理的具體步驟為：先用75％(v/v)乙醇處理50～70s后，用ddH₂O沖洗3～5次，然后用5％次氯酸鈉消毒處理5～7min，之后ddH₂O沖洗3～5次，再用75％乙醇處理50～70s后，用ddH₂O沖洗3～5次。

3.根據權利要求1所述的利用糖源配比優化百子蓮胚性愈傷繼代周期及頻次的方法，其特征在于，步驟A中，所述小花梗外植體切成0.7～1.0cm的小段。

4.根據權利要求1所述的利用糖源配比優化百子蓮胚性愈傷繼代周期及頻次的方法，其特征在于，步驟B中，所述愈傷組織誘導培養基組分為：MS+1.5～2.0mg·L^-1PIC+2.5～3.5％蔗糖+0.6～1.0％瓊脂，pH 5.8。

5.根據權利要求1所述的利用糖源配比優化百子蓮胚性愈傷繼代周期及頻次的方法，其特征在于，步驟C中，所述愈傷組織繼代培養基組分為：MS+1.5～2.0mg·L^-1PIC+1.0～1.5％蔗糖+1.5～2.0％麥芽糖+0.6～1.0％瓊脂，pH5.8。

6.根據權利要求1所述的利用糖源配比優化百子蓮胚性愈傷繼代周期及頻次的方法，其特征在于，步驟D中，所述胚性愈傷組織誘導培養基組分為：MS+1.0～1.5mg·L^-1PIC+2.5～3.5％蔗糖+0.6～1.0％瓊脂，pH5.8。

7.根據權利要求1所述的利用糖源配比優化百子蓮胚性愈傷繼代周期及頻次的方法，其特征在于，步驟E中，所述繼代保存培養基組分為：MS+1.0～1.5mg·L^-1PIC+1.5％蔗糖+1.5％麥芽糖+0.6～1.0％瓊脂，pH5.8。

8.根據權利要求1所述的利用糖源配比優化百子蓮胚性愈傷繼代周期及頻次的方法，其特征在于，步驟F中，所述成熟胚誘導培養基組分為：MS+3％蔗糖+0.6～1.0％瓊脂，pH5.8。

9.根據權利要求1所述的利用糖源配比優化百子蓮胚性愈傷繼代周期及頻次的方法，其特征在于，步驟B中，所述暗培養溫度為25℃、培養55～65d；

步驟C中，所述暗培養溫度為22～28℃，以55～65d為一個繼代周期，繼代培養2次；

步驟D中，所述暗培養溫度為22～28℃，每30d繼代一次，培養50～70d；

步驟E中，所述暗培養溫度為22～28℃，以55～65d為一個繼代培養周期；

步驟F中，所述暗培養溫度為22～28℃，培養7d；所述光下培養采用光/暗時間比為14h/10h，光照強度為50μmoL·m^-2·s^-1，培養30d。