[發明專利]源自棗樹鏈霉菌屬ZH-356、菌劑及制備方法和應用

有效

• 申請號: 202110050193.1
• 申請日: 2021-01-14
• 公開（公告）號: CN112646748B
• 公開（公告）日: 2023-03-10
• 發明（設計）人: 林金水;張恒;王帥濤;成娟麗;王貴鋒;王晶瑤;李盼欣
• 申請（專利權）人: 延安柯龍尼生物科技有限公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;A01N63/28;A01P3/00;C12R1/465
• 代理公司: 西安弘理專利事務所 61214
• 代理人: 王敏強

1.源自棗樹的鏈霉菌屬ZH-356，所述菌種保藏于中國典型培養物保藏中心，保藏編號為CCTCC No：M2020690，保藏日期：2020年11月6日。

2.一種胞內活性提取物，其特征在于，所述胞內活性提取物是在權利要求 1 所述的鏈霉菌屬ZH-356細胞中提取；所述鏈霉菌屬ZH-356在發酵培養時產生的活性物質只在胞內積累，并不會分泌至胞外，而當鏈霉菌屬ZH-356遭遇植物病原真菌時，才會分泌活性物質以抑制植物病原真菌的生長。

3.一種用于生物防治的菌劑，其特征在于，所述菌劑的活性成分為權利要求1所述的鏈霉菌屬ZH-356的菌體或權利要求2所述的胞內活性提取物，所述菌劑采用顆粒、粉末、片劑固體外形或是液體、糊狀、膠狀、膏狀流體形式。

4.一種權利要求2所述的一種胞內活性提取物的制備方法，其特征在于，具體包括以下制備步驟：

步驟1，種子液的制備；

將鏈霉菌屬ZH-356接種至種子培養基中，在28℃～30℃、180r/min～200r/min振蕩條件下培養1d～2d，得到種子液；

步驟2，發酵培養；

將步驟1得到的種子液接入發酵培養基中，接種量為5％～7％，在28℃～30℃、180r/min～200r/min振蕩條件下培養6d～7d，得到發酵液；

步驟3，胞內活性提取物的制備；

將步驟2中得到的發酵液通過離心收集菌體，將菌體用丙酮浸泡1d，離心收集丙酮提取液，沉淀使用丙酮浸泡，并用超聲波輔助提取，離心收集丙酮提取液，重復三次，直至丙酮提取液為無色透明，合并丙酮提取液，使用旋轉蒸發儀濃縮揮干后，即得到胞內濃縮物，該胞內濃縮物即為胞內活性提取物。

5.根據權利要求4所述的一種胞內活性提取物的制備方法，其特征在于，所述步驟1中種子培養基由以下重量配比的物質組成：胰蛋白胨17.0g/L～22.0g/L，大豆蛋白胨3.0g/L～8.0g/L，氯化鈉5.0g/L～7.5g/L，磷酸氫二鉀2.5g/L～3.5g/L，葡萄糖2.5g/L～3.5g/L，pH7.2～7.3，溶劑為水。

6.根據權利要求4所述的一種胞內活性提取物的制備方法，其特征在于，所述發酵培養基由以下重量配比的物質組成：碳源10.0g/L～15.0g/L；有機氮源5.0g/L～8.0g/L，無機氮源5.0g/L～8.0g/L，天冬酰胺1.0g/L～2.0g/L，甜菜堿1.25g/L～2.0g/L，pH為7.1～7.3，溶劑為水。

7.根據權利要求6所述的一種胞內活性提取物的制備方法，其特征在于，所述碳源為甘油、大米粉、黃豆餅粉、淀粉、花生餅粉、棉子餅粉、玉米漿、魚粉、蠶蛹粉、麩皮、燕麥粉或纖維素中的任意一種；有機氮源為酵母提取物、蛋白胨、酪蛋白或牛肉膏中任意一種；無機氮源為硝酸鹽、氨水或銨鹽中任意一種。

8.一種權利要求1所述的鏈霉菌屬ZH-356的菌體用于制備蘋果樹腐爛病菌、小麥赤霉病菌、小麥根腐病菌和番茄早疫病菌的生物制劑以及在植物真菌病害防治中的應用。

9.一種權利要求2所述的胞內活性提取物用于制備蘋果樹腐爛病菌、小麥赤霉病菌、小麥根腐病菌和番茄早疫病菌的生物制劑以及在植物真菌病害防治中的應用。