[發明專利]一種朱頂紅優質種苗組織培養快速繁殖方法

有效

• 申請號: 202110048552.X
• 申請日: 2021-01-14
• 公開（公告）號: CN112690213B
• 公開（公告）日: 2022-07-12
• 發明（設計）人: 曾宋君;吳坤林;房林;鄧莎;李琳;周世明;張文心;曹雪瑩
• 申請（專利權）人: 中國科學院華南植物園;東莞市圣茵城市景觀農業工程研究中心
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 廣州科粵專利商標代理有限公司 44001
• 代理人: 胡素麗;劉明星

1.一種朱頂紅優質種苗組織培養快速繁殖方法，其特征在于，包括以下步驟：

a、外植體消毒：將朱頂紅鱗莖作為外植體去除葉片和根系，將鱗莖盤切下并切割，鱗莖盤帶長度為2-3厘米的鱗莖，將切割后的鱗莖盤進行消毒處理后，接種到不定芽誘導培養基上進行初代培養，培養溫度24-30℃，光照3000-3500lx，光照12-16小時/天，所述的不定芽誘導培養基每升含有：6-芐基嘌呤5.0-10.0毫克、噻苯隆0.5-1.0毫克、蔗糖30克、瓊脂6.0-6.5克，余量為MS培養基，pH 5.8-6.0；

b、不定芽誘導：將初代培養的鱗莖盤轉入新的所述的不定芽誘導培養基上繼續初代培養，培養基表面加頭孢霉素溶液，培養溫度24-30℃，光照3000-3500lx，光照12-16小時/天，鱗莖盤基部形成不定芽；

c、不定芽初代增殖：將初代培養形成的不定芽轉入不定芽初代增殖培養基上繼代培養，培養溫度24-30℃，光照3000-3500lx，光照12-16小時/天，獲得叢生芽；所述的不定芽初代增殖培養基每升含有：6-芐基嘌呤5.0-10.0毫克、噻苯隆0.5-1.0毫克、硝酸銀1.0-5.0毫克、蔗糖30克、瓊脂6.0-6.5克，余量為MS培養基，pH 5.8-6.0；

d、不定芽壯苗培養：將繼代培養獲得的叢生芽切割成單芽后放入壯苗培養基上進行壯苗培養，培養溫度24-30℃，光照3000-3500lx，光照12-16小時/天，單芽基部形成鱗莖；所述的壯苗培養基每升含有：6-芐基嘌呤3.0-5.0毫克、蔗糖40-60克、瓊脂6.0-6.5克，余量為改良MS培養基，pH 5.8-6.0；

e、小鱗莖分切增殖：將步驟d獲得的鱗莖切割后接種到增殖培養基上培養，培養溫度24-30℃，光照3000-3500lx，光照12-16小時/天，鱗莖形成叢生芽；獲得的叢生芽能用于生根培養或重復步驟d和e進行繼代增殖培養；所述的增殖培養基每升含有：6-芐基嘌呤5.0-10.0毫克、噻苯隆0.5-1.0毫克、蔗糖30克、瓊脂6.0-6.5克，余量為MS培養基，pH 5.8-6.0；

f、生根培養：將獲得的叢生芽切成單芽后接種到生根培養基上進行生根，培養溫度24-30℃，光照3000-3500lx，光照12-16小時/天，獲得試管苗；所述的生根培養基每升含有：吲哚丁酸0.5-1.0毫克、萘乙酸0.5-1.0毫克、蔗糖40-60克、香蕉勻漿50-100克、瓊脂6.0-6.5克，余量為改良MS培養基，pH 5.8-6.0；

g、試管苗移栽：將試管苗轉移到自然光下煉苗，然后洗凈根部的培養基，移入栽培基質中培養，獲得朱頂紅種苗；

所述的外植體是通過以下預處理方法獲得的：選擇成年朱頂紅鱗莖為材料，在選取外植體消毒之前的42天前，先用50%多菌靈可濕性粉劑500-800倍稀釋液澆灌一次并噴施葉片，7天后用72%農用鏈霉素可溶性粉劑3000-4000倍稀釋液澆灌一次并噴施葉片，然后每過7天，用72%農用鏈霉素可溶性粉劑3000-4000倍稀釋液澆灌一次并噴施葉片，最后1次澆灌72%農用鏈霉素可溶性粉劑3000-4000倍稀釋液后7天，選取處理過的朱頂紅鱗莖為外植體；

所述的改良MS培養基是NH₄NO₃和KNO₃改變為原來的1.5倍，其余成分不變；

所述的將切割后的鱗莖盤進行消毒處理具體為：將切割后的鱗莖盤浸泡在體積分數75%酒精中10-30秒，用1.0%有效氯的次氯酸溶液浸泡8-10分鐘，無菌水沖洗4-5次，再用質量分數0.1%升汞溶液消毒8-10分鐘，無菌水沖洗4-5次，然后置于醫用鏈霉素1500-2000倍稀釋液中振蕩24小時；

所述的頭孢霉素溶液為濃度為30-50毫克/升的頭孢霉素水溶液。

2.根據權利要求1所述的朱頂紅優質種苗組織培養快速繁殖方法，其特征在于，所述的栽培基質包括泥炭、椰糠和珍珠巖，所述的泥炭、椰糠和珍珠巖的體積比為3：3：1。

3. 根據權利要求1所述的朱頂紅優質種苗組織培養快速繁殖方法，其特征在于，所述的朱頂紅為圣茵1號朱頂紅（Hippeastrum ‘Shengyin No.1’）、圣茵3號朱頂紅（Hippeastrum‘Shengyin No.3’）或雙艷朱頂紅（Hippeastrum ‘Shuangyan’） 。